滋陰活血方藥對糖尿病大鼠牙周組織TNF-α和MMP-3表達的影響.pdf

1、目的：通過建立大鼠糖尿病模型，觀察糖尿病大鼠牙周組織中TNF-α和MMP-3的表達變化及牙周組織的病理學(xué)改變，探討滋陰活血方藥對其變化的影響，為糖尿病牙周炎的預(yù)防提供理論依據(jù)。 方法：選用6月齡雄性Wistar大鼠36只，隨機分為4組：正常對照組8只、糖尿病組10只、糖尿病中藥治療組(中藥組)9只、糖尿病西藥治療組(西藥組)9只。除對照組外，其余三組空腹一次性腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)溶液(45

2、mg/kg體重)溶液，制備糖尿病模型。注射STZ溶液3天后，尾尖采血測空腹血糖，用代謝籠收集12小時尿測定尿糖。確定糖尿病模型建立后，中藥組給予滋陰活血方藥(Nourishing Yin and Promoting Blood-flowRecipe，NYPBR)，按人和動物間體表面積折算的等效劑量比值給藥，每只大鼠3ml/天灌養(yǎng)(含生藥1g/ml)；西藥組給予尿酸鹽(urate)，按每只160mg/kg/天灌養(yǎng)。所有大鼠實驗期間正常進食

3、水，在20-25℃室溫下，持續(xù)飼養(yǎng)12周，并在12周時檢測血糖、尿糖、體重一次。12周后股動脈放血處死大鼠，迅速分離上頜骨固定于10％甲醛溶液中。制作牙體牙周聯(lián)合切片，HE染色，光鏡觀察；TNF-α和MMP-3免疫組織化學(xué)染色，觀測其在牙周組織中的表達。 結(jié)果： 1腹腔注射STZ后第3天，正常組空腹血糖平均值5.51mmol/L，尿糖(-)。注射STZ大鼠血糖值均大于15mmol/L，尿糖(+++)，與正常組比較，血糖顯

4、著升高(P＜0.001)。12周后，糖尿病組、中藥組和西藥組血糖均明顯高于正常組(p＜0.001)，體重明顯低于正常組(p＜0.001)；中藥組血糖明顯低于糖尿病組(P＜0.001)和西藥組(p＜0.01)，西藥組血糖與糖尿病組無明顯差異(P＞0.05)，中藥組、西藥組和糖尿病組體重?zé)o明顯差異(P＞0.05)。 2組織學(xué)觀察： 正常組：結(jié)合上皮附著于釉牙骨質(zhì)界，與牙體組織結(jié)合牢固，上皮無炎性浸潤，牙齦及牙周膜纖維排列有序

5、、整齊，牙槽骨邊緣平整，未見破骨細胞數(shù)，牙槽嵴項無吸收。 糖尿病組：結(jié)合上皮附著于釉牙骨質(zhì)界，牙齦上皮和固有層內(nèi)有中度炎細胞浸潤，牙齦和牙周膜內(nèi)毛細血管數(shù)目增多、擴張充血，纖維排列紊亂和斷裂，牙槽骨邊緣骨吸收陷窩多，陷窩內(nèi)見破骨細胞，牙槽嵴頂無吸收。 中藥組：結(jié)合上皮附著于釉牙骨質(zhì)界，牙齦上皮和固有層內(nèi)有輕度炎細胞浸潤，毛細血管無明顯擴張充血，纖維有新生，排列較整齊，牙槽骨邊緣骨吸收陷窩較少，破骨細胞明顯減少，成骨細胞數(shù)

6、相對增多，牙槽嵴頂無吸收。 西藥組：與中藥組相似。 3TNF-α和MMP-3在牙周組織中的表達正常組：TNF-α主要在牙齦上皮表層、粒層、棘層和基底層細胞、成纖維細胞和血管內(nèi)皮細胞胞漿中呈弱陽性表達；MMP-3主要在成纖維細胞、牙槽骨邊緣細胞(主要是成骨細胞)胞漿中呈弱陽性表達，在牙齦上皮呈陰性表達。 糖尿病組：TNF-α在牙齦上皮表層、粒層和棘層細胞、成纖維細胞、血管內(nèi)皮細胞、成骨細胞、破骨細胞和骨髓基質(zhì)細胞胞

7、漿中呈強陽性表達，在牙齦上皮基底層呈陽性表達；MMP-3在牙齦上皮表層、粒層和棘層細胞、成纖維細胞、牙槽骨邊緣細胞(主要是破骨細胞)和骨髓基質(zhì)細胞胞漿中呈強陽性表達，在牙齦上皮基底層呈陰性表達。 中藥組：TNF-α在牙齦上皮表層、粒層、棘層和基底層細胞、成纖維細胞和血管內(nèi)皮細胞胞漿中呈弱陽性表達：MMP-3在牙齦上皮表層、粒層和棘層細胞、成纖維細胞、牙槽骨邊緣細胞(成骨細胞和破骨細胞)胞漿中呈弱陽性表達，在牙齦上皮基底層呈陰性表

8、達。 西藥組：表達部位與表達水平與中藥組相似。 4陽性信號強度(灰度)值測定： TNF-α的灰度值：糖尿病組明顯低于正常組(P＜0.05)；中藥組和西藥組與正常組無明顯差異(P＞0.05)；中藥組和西藥組明顯高于糖尿病組(NYPBR：P＜0.001，urate：P＜0.05)：中藥組高于西藥組(P＜0.05)。 MMP-3的灰度值：糖尿病組明顯低于正常組(P＜0.001)；中藥組和西藥組與正常組無明顯差異

9、(P＞0.05)；中藥組和西藥組明顯高于糖尿病組(NYPBR：P＜0.001，urate：P＜0.05)：中藥組高于西藥組(P＜0.01)。 結(jié)論： 1.STZ腹腔注射法建立了大鼠糖尿病模型。 2糖尿病大鼠牙周組織中TNF-α和MMP-3表達增強，組織形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，降低了牙周組織抵抗、防御細菌侵襲的能力。這種亞臨床病理改變，可能是糖尿病易發(fā)生牙周炎、加重牙周炎發(fā)生發(fā)展的因素之一。 3滋陰活血方藥和尿酸鹽均可使