蕓薹根腫菌生活史研究Ⅱ——病原菌的侵染與致病.pdf

1、蕓薹根腫菌（Plasmodiophora brassicae Woronin）侵染引起的根腫病是十字花科蔬菜生產(chǎn)中的毀滅性病害，嚴(yán)重威脅著世界十字花科蔬菜的生產(chǎn)安全。在生產(chǎn)上，選育抗病品種是控制根腫病的重要手段，但因根腫菌易變，導(dǎo)致選育的抗病品種很快失去利用價(jià)值。因此，根腫病的防治始終是十字花科蔬菜生產(chǎn)上的一個(gè)難題，而從生活史上闡明致病機(jī)理對(duì)于新型殺菌劑的開發(fā)及綜合控制策略的制定具有重要的理論指導(dǎo)意義。本文在實(shí)驗(yàn)室前期的研究基礎(chǔ)上，首先

2、優(yōu)化了休眠孢子囊的萌發(fā)條件，其次用水培法研究了根腫菌侵染不結(jié)球白菜的無性短循環(huán)過程及初生游動(dòng)孢子和次生游動(dòng)孢子的致病作用;最后用透射電鏡切片觀察了休眠孢子囊及次生包囊的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。研究結(jié)果如下:
　　1.休眠孢子囊萌發(fā)的優(yōu)化研究
　　采用淺層液體培養(yǎng)法，研究發(fā)現(xiàn)黑麥草根分泌物較寄主根分泌物對(duì)根腫菌休眠孢子囊的萌發(fā)促進(jìn)作用更強(qiáng);黑麥草根分泌物經(jīng)稀釋后促進(jìn)作用減弱，當(dāng)稀釋至10％及以下時(shí)無促進(jìn)作用;冷藏保存后的休眠孢子囊萌發(fā)力降低

3、，保存20 d后，萌發(fā)率僅有0.34％。在優(yōu)化的最適條件下觀察了休眠孢子囊的萌發(fā)動(dòng)態(tài)，培養(yǎng)第7d萌發(fā)率最高，為2.16％，累積萌發(fā)率達(dá)到5.10％。
　　2.蕓薹根腫菌侵染不結(jié)球白菜的最適條件及無性短循環(huán)研究
　　采用水培法（羅紅春等，2014），研究了蕓薹根腫菌侵染不結(jié)球白菜的最適條件，接種時(shí)不更換營(yíng)養(yǎng)液侵染較好，最適侵染溫度為25℃，最適pH值為5.5，最適接種濃度為107個(gè)/mL。在最適水培條件下，前后培養(yǎng)3批不結(jié)球白

4、菜，驗(yàn)證了蕓薹根腫菌侵染不結(jié)球白菜后，次生游動(dòng)孢子會(huì)從根毛釋放出來再次侵染根毛和表皮，生活史中存在無性短循環(huán)過程。
　　3.蕓薹根腫菌初生游動(dòng)孢子和次生游動(dòng)孢子的致病作用研究
　　初生游動(dòng)孢子致病作用研究中，選用保護(hù)性殺菌劑氟啶胺作為抑制劑，將根毛被侵染而次生游動(dòng)孢子尚未排出的不結(jié)球白菜置于加有適量抑制劑的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，與未加抑制劑的對(duì)照組比較，觀察發(fā)病情況;次生游動(dòng)孢子的致病作用研究采用無性短循環(huán)研究的方法，將各批寄主接種

5、后水培25 d、砂培40 d后觀察發(fā)病情況;石蠟切片發(fā)病植株腫根，檢查根部細(xì)胞是否被根腫菌侵染。結(jié)果表明，初生游動(dòng)孢子和次生游動(dòng)孢子均能單獨(dú)侵染不結(jié)球白菜并致其發(fā)病，形成腫根，石蠟切片觀察到被侵染的細(xì)胞充滿休眠孢子囊。
　　4.蕓薹根腫菌休眠孢子囊和次生包囊超微結(jié)構(gòu)的觀察
　　土培接種榨菜幼苗，接種后第10d拔出幼苗，沖洗干凈根部，三角瓶中加入蒸餾水，振蕩被侵染的根收集蕓薹根腫菌次生包囊，透射電鏡觀察蕓薹根腫菌休眠孢子囊和次