主要的動(dòng)物病原菌

1、第五單元 主要的動(dòng)物病原菌,南京農(nóng)業(yè)大學(xué)張 煒,,球菌鏈球菌屬---豬鏈球菌蜂房球菌 腸桿菌科埃希菌屬—大腸埃希氏菌沙門(mén)氏菌屬---沙門(mén)氏菌,巴氏桿菌科及相關(guān)屬巴氏桿菌屬---多殺巴氏桿菌里氏桿菌屬---鴨疫里氏桿菌嗜血桿菌屬---副豬嗜血桿菌放線桿菌屬---胸膜肺炎放線桿菌,,革蘭氏陰性需氧桿菌布魯氏菌屬---布魯氏菌伯氏菌屬---鼻疽伯氏菌波氏菌屬---支氣管敗血波氏菌,革蘭氏陽(yáng)性無(wú)芽孢桿菌李氏桿菌

2、屬---產(chǎn)單核細(xì)菌李氏桿菌 革蘭氏陽(yáng)性產(chǎn)芽孢桿菌芽孢桿菌屬---炭疽芽孢桿菌梭菌屬---產(chǎn)氣莢膜桿菌擬幼蟲(chóng)芽孢桿菌,,分支桿菌牛分支桿菌副結(jié)核分支桿菌 螺旋體豬痢短螺旋體 支原體雞毒支原體豬肺炎支原體牛支原體,真菌白僵菌蜜蜂球囊菌變種（蜜蜂病原） 類菌質(zhì)體蜜蜂螺旋菌質(zhì)體,第1節(jié) 球菌,葡萄球菌屬和鏈球菌屬是人和動(dòng)物的重要致病菌。,一、鏈球菌屬,鏈球菌屬細(xì)菌是化膿性球菌中的另一大類常見(jiàn)細(xì)菌，廣泛分布于自然界

3、，多數(shù)不致病，有些可導(dǎo)致人或動(dòng)物各種化膿性炎癥、肺炎、乳腺炎、敗血癥。,鏈球菌在血平板上的溶血現(xiàn)象分為,α型溶血鏈球菌 在菌落周圍形成不透明的草綠色溶血環(huán)，紅細(xì)胞未溶解，血紅蛋白變成綠色。致病力不強(qiáng)，多為機(jī)會(huì)致病菌。β型溶血鏈球菌 菌落周圍形成完全透明的溶血環(huán)，紅細(xì)胞完全溶解。這類菌致病力強(qiáng)，常引起人及動(dòng)物各種疾病。γ型溶血鏈球菌 菌落周圍無(wú)溶血現(xiàn)象。一般為非致病菌。,1 形態(tài)及染色,豬鏈球菌,球形或卵圓形，直徑0.6-1.0

4、um。呈鏈狀排列，鏈長(zhǎng)短不一。致病性菌鏈長(zhǎng)，液體培養(yǎng)基中菌鏈長(zhǎng)。,2、培養(yǎng)及生化特性,大多數(shù)兼性厭氧，少數(shù)為專性厭氧。營(yíng)養(yǎng)要求復(fù) 雜，需補(bǔ)充血液、血清、葡萄糖等。在血液瓊脂平板上形成灰白色、表面光滑、邊緣整齊、直徑0.5-0.75mm的細(xì)小菌落。不同菌株溶血不一。在血清肉湯中易形成長(zhǎng)鏈，管底呈絮狀沉淀。,3.致病性及毒力因子,可致豬腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、肺炎、心內(nèi)膜炎、多發(fā)性漿膜炎、流產(chǎn)和局部膿仲。二大類毒力因子一類與黏附有關(guān)一類

5、毒素。,,4 微生物學(xué)診斷,標(biāo)本的采集：根據(jù)臨床疾病類型的不同，采集適當(dāng)?shù)?標(biāo)本—滲出液、膿汁、乳腺炎乳液、腦脊髓液、 尿液和感染組織。檢驗(yàn)方法（一）直接檢查： 可直接涂片，革蘭氏染色鏡檢。（二）分離培養(yǎng): 在涂片前先接種血平板，37℃24-48h。 觀察菌落形態(tài)和溶血情況。然后涂片染色鏡檢。（三）細(xì)菌鑒定：菌落形態(tài)、溶血特性、細(xì)菌形態(tài)、生 化特性。

6、如定群、定型，則要作血清學(xué)試驗(yàn)。PCR,二、蜂房球菌,歐洲幼蟲(chóng)腐臭病病原為蜂房球菌。一種蜜蜂幼蟲(chóng)病害。,第2節(jié) 腸桿菌科,大腸埃希氏菌沙門(mén)氏菌,,腸桿菌科是由一大群生化和遺傳上相關(guān)的中等大小桿菌所組成。其共同特性為：革蘭陰性、非抗酸性、無(wú)芽胞的兼性厭氧菌。本科細(xì)菌廣泛分布于自然界，包括腐生菌、寄生菌和人及動(dòng)物的病原菌。,代表屬,埃希菌屬（Escherichia） 沙門(mén)菌屬（Salmonella）,大腸埃希菌,本菌系人和溫血?jiǎng)游锬c

7、道內(nèi)正常菌群成員之一，終生伴隨，經(jīng)糞便不斷散播于周圍環(huán)境。在環(huán)境衛(wèi)生和食品衛(wèi)生學(xué)上，常被用作糞便直接或間接污染的檢測(cè)指標(biāo)。,1.形態(tài)及染色特性,大腸桿菌為革蘭陰性無(wú)芽胞的直桿菌，大小0.4-0.7×2-3μm，大多數(shù)菌株以周生鞭毛運(yùn)動(dòng)，但也有無(wú)鞭毛的變異株。某些致病菌株有莢膜或微莢膜。,革蘭染色的大腸桿菌,2.培養(yǎng)及生化特性,本菌為兼性厭氧菌，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，最適生長(zhǎng)溫度為37℃，最適生長(zhǎng)pH為7.2-7.4。

8、麥康凱瓊脂上形成紅色菌落；可與沙門(mén)氏菌區(qū)別。在SS瓊脂上一般不生長(zhǎng)或生長(zhǎng)較差，生長(zhǎng)者呈紅色。一些致病性菌株在綿羊血平板上呈β溶血。在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)24h后，形成圓形凸起、光滑、濕潤(rùn)、半透明、灰白色菌落，直徑約2-3mm。S型菌株在肉湯中培養(yǎng)18-24h，呈均勻渾濁，管底有粘性沉淀，液面管壁有菌環(huán)。 本菌能發(fā)酵多種碳水化合物產(chǎn)酸產(chǎn)氣。大多數(shù)菌株可迅速發(fā)酵乳糖和山梨醇,3.致病性及毒力因子,一類是細(xì)菌寄生部位發(fā)生改變，如移位侵入腸

9、外組織或器官，成為機(jī)會(huì)致病菌；另一類是病原性大腸桿菌，與人和動(dòng)物的大腸桿菌?。–olibacilosis）密切相關(guān)，正常情況下極少存在于健康機(jī)體內(nèi),與動(dòng)物疾病有關(guān)的大腸桿菌可分為五類：產(chǎn)腸毒素大腸桿菌，ETEC ：幼畜腹瀉腸致病型大腸桿菌，EPEC 產(chǎn)類志賀毒大腸桿菌，SLTEC敗血性大腸桿菌，SEPEC尿道致病性大腸桿菌，UPEC,（2）與大腸桿菌致病有關(guān)的毒力因子,定居因子：粘附素包括菌毛和非菌毛類蛋白，具有粘附于宿主

10、的小腸上皮細(xì)胞的能力，故稱為粘附素（adhesin）在動(dòng)物源ETEC中已發(fā)現(xiàn)的菌毛粘附素主要有F4（K88）、F5（K99）、F6（987P）、F41、F42、F165、F17（舊稱為FY或Att25）和F18 。,,腸毒素是ETEC在體內(nèi)或體外生長(zhǎng)時(shí)產(chǎn)生并分泌到胞外的一種蛋白質(zhì)毒素，可分為不耐熱腸毒素（heat-labile enterotoxin，LT）和耐熱腸毒素（heat-stable enterotoxin，ST）兩種。

11、,4.微生物學(xué)診斷,分離培養(yǎng)：無(wú)菌采集病變組織，在血瓊脂或麥康凱平板上劃線分離培養(yǎng)。生化鑒定：挑取麥康凱平板上的紅色菌落或血平板上呈β溶血的典型菌落，分別轉(zhuǎn)種三糖鐵（TSI）培養(yǎng)基和普通瓊脂斜面做初步生化鑒定和純培養(yǎng)?？乖b定：將TSI瓊脂反應(yīng)模式符合埃希菌屬的生長(zhǎng)物或其相應(yīng)的普通斜面純培養(yǎng)物做O抗原鑒定。檢測(cè)毒力因子：進(jìn)而檢測(cè)毒力因子，便可確定其屬于何類致病性大腸桿菌。,大腸桿菌分離鑒定程序,二、沙門(mén)氏菌,,沙門(mén)菌屬是一群寄生

12、于人和動(dòng)物腸道內(nèi)的革蘭陰性桿菌，生化特性和抗原結(jié)構(gòu)相似，兼性厭氧。絕大多數(shù)發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，也偶爾有不產(chǎn)氣的。在三糖鐵瓊脂上常產(chǎn)生H2S為人類食物中毒的主要病原之一，對(duì)醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)學(xué)和公共衛(wèi)生均十分重要。,1.形態(tài)及染色特性,沙門(mén)菌的形態(tài)和染色特性與同科的大多數(shù)其它菌屬相似，呈直桿狀，0.7-1.5×2.0 -5μm，革蘭陰性。除雛沙門(mén)菌和雞沙門(mén)菌無(wú)鞭毛不運(yùn)動(dòng)外，其余各菌均以周生鞭毛運(yùn)動(dòng)，且絕大多數(shù)具有Ⅰ型菌毛。,致病性

13、,本屬具有極其廣泛的動(dòng)物宿主，是一種重要的人畜共患病病原。不僅引致人的傷寒、副傷寒、急性胃腸炎、敗血癥等疾病，還侵害幼、青年動(dòng)物，使之發(fā)生敗血癥、胃腸炎及其它組織局部炎癥。對(duì)成年動(dòng)物則往往引起散發(fā)性或局限性沙門(mén)菌病，發(fā)生敗血癥的懷孕母畜可表現(xiàn)流產(chǎn)。,,在發(fā)病的畜禽群中，具有一定比例的個(gè)體是隱性感染或康復(fù)帶菌者，并間歇地排菌，成為主要傳染源。沙門(mén)菌很容易在動(dòng)物與動(dòng)物、動(dòng)物與人、人與人之間通過(guò)直接或間接的途徑傳播，沒(méi)有中間宿主。主要

14、傳染途徑是消化道。衛(wèi)生不良、應(yīng)激以及發(fā)生病毒或寄生蟲(chóng)感染，均可誘發(fā)易感動(dòng)物沙門(mén)菌病。,（2）毒力因子,菌毛內(nèi)毒素腸毒素,4.微生物學(xué)診斷,分離培養(yǎng)：未污染的被檢組織可直接培養(yǎng)基平板上劃線分離，但已污染的被檢材料需要增菌培養(yǎng)基增菌后，再用鑒別培養(yǎng)基分離。生化鑒定血清型分型,沙門(mén)菌的革蘭氏染色,沙門(mén)菌的麥康凱培養(yǎng),第3節(jié) 巴氏桿菌科及相關(guān)屬,巴氏桿菌屬（Pasteurella里氏桿菌屬（Riemerella）放線桿菌屬（Acti

15、nobacillus）嗜血桿菌屬（Haemophilus）,多殺巴氏桿菌病鴨疫里氏桿菌病豬傳染性胸膜肺炎豬副豬嗜血桿菌病,,,,,一、巴氏桿菌屬：多殺性巴氏桿菌,本菌是引起多種畜禽巴氏桿菌病（Pasteurellosis）的病原體，主要使動(dòng)物發(fā)生出血性敗血病或傳染性肺炎。廣泛分布于世界各地。在同種或不同動(dòng)物間可相互傳染，也可感染人，大多因被動(dòng)物咬傷所致。,1.形態(tài)及染色,為球桿狀或短桿狀菌，兩端鈍圓，大小為0.25-0.4&

16、#215;0.5-2.5?m。單個(gè)存在，有時(shí)成雙排列病料涂片用瑞氏染色或美藍(lán)染色時(shí)，可見(jiàn)典型的兩極著色無(wú)鞭毛，不形成芽胞。革蘭染色陰性,美藍(lán)染色,2.培養(yǎng)及生化特性,需氧或兼性厭氧菌。對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求較嚴(yán)格。在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)貧瘠，在麥康凱培養(yǎng)上不生長(zhǎng)。在加有血液、血清或微量血紅素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好。在血瓊脂平板上培養(yǎng)24h，長(zhǎng)成水滴樣小菌落，無(wú)溶血現(xiàn)象。從病料新分離的強(qiáng)毒菌株具有莢膜，菌落為粘液型，較大。,3.致病性與毒力因

17、子,本菌是多種動(dòng)物的重要病原菌。對(duì)雞、鴨、鵝、野禽、豬、牛、馬、兔等都可致病，急性型呈出血性敗血癥迅速死亡，如牛出血性敗血癥、豬肺疫、禽霍亂、兔巴氏桿菌病等；慢性型則呈現(xiàn)萎縮性鼻炎（豬、羊）、關(guān)節(jié)炎及局部化膿性炎癥等。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中小鼠極易感染，鴿對(duì)殺禽亞種的易感性強(qiáng)。,豬肺疫,禽霍亂,,具有莢膜的菌株有較強(qiáng)的抗性，莢膜成分為透明質(zhì)酸，有抗吞噬作用。研究表明，殺禽亞種的致病力與菌體的內(nèi)毒素有關(guān)。該內(nèi)毒素是一種含氮的磷酸脂多糖，與菌

18、體結(jié)合不緊密，用福爾馬林鹽水可洗脫，少量注入雞體，即可引致禽霍亂，表現(xiàn)出血性敗血癥狀。已知A、B、D型菌株具有4型菌毛。本菌的鐵載體名為多殺素（multocidin），也與毒力有關(guān)。,微生物學(xué)診斷,采取滲出液、心血、肝、脾、淋巴結(jié)、骨髓等新鮮病料涂片或觸片，以堿性美藍(lán)液或瑞氏染色液染色，顯微鏡檢查，如發(fā)現(xiàn)典型的兩極著色的短桿菌，結(jié)合流行病學(xué)及剖檢，即可作初步診斷。但慢性病例或腐敗材料不易發(fā)現(xiàn)典型菌體，須進(jìn)行培養(yǎng)和動(dòng)物試驗(yàn)。可用血瓊

19、脂分離培養(yǎng)，疑似菌落再接種在三糖鐵培養(yǎng)基，細(xì)菌生長(zhǎng)，使底部變黃。必要時(shí)可進(jìn)一步做生化反應(yīng)作鑒定。,,動(dòng)物試驗(yàn) 用病料懸液或分離培養(yǎng)菌，皮下注射小鼠、家兔或鴿，動(dòng)物多在24-48h內(nèi)死亡。參照患畜的生前臨床癥狀和剖檢變化，結(jié)合分離菌株的毒力試驗(yàn)，作出診斷。,,血清學(xué)鑒定若要鑒定莢膜抗原和菌體抗原型，則要用抗血清或單克隆抗體進(jìn)行血清學(xué)試驗(yàn)。檢測(cè)動(dòng)物血清中的抗體，可用試管凝集、間接凝集、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)或ELISA。,二、里氏桿菌屬：鴨

20、疫里氏桿菌,鴨疫里氏桿菌（R. anatipestifer）是本屬的代表種，原名鴨疫巴氏桿菌。該菌與巴氏桿菌屬的rRNA不同源，與黃桿菌等相近，因此建議建立里氏桿菌新屬，歸于黃桿菌科（Flavobacteriaceae,1.形態(tài)及染色,菌體呈桿狀或橢圓形，大小0.3-0.5×0.7-6.5μm，偶見(jiàn)個(gè)別長(zhǎng)絲狀。多為單個(gè)，少數(shù)成雙或短鏈排列。可形成莢膜，無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛。瑞氏染色可見(jiàn)兩極著色。革蘭染色陰性。,培養(yǎng)及生化特

21、性,本菌營(yíng)養(yǎng)要求較高，普通培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。初次分離培養(yǎng)供給5%-10%的CO2易于生長(zhǎng)。在巧克力或胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）平板上，CO2培養(yǎng)箱或蠟燭缸中，37℃培養(yǎng)24-48h，生長(zhǎng)的菌落無(wú)色素，呈圓形、表面光滑，直徑1-2mm。在含血清或胰蛋白胨酵母的肉湯中，37℃48h培養(yǎng)，呈上下一致輕微混濁，管底有少量沉淀。,,本菌不發(fā)酵葡萄糖、蔗糖，可與多殺性巴氏桿菌區(qū)別。極少數(shù)菌株發(fā)酵麥芽糖或肌醇。靛基質(zhì)、硝酸鹽還原、檸

22、檬酸鹽利用、VP、甲基紅試驗(yàn)、硫化氫產(chǎn)生、尿素分解等均為陰性。氧化酶、觸酶試驗(yàn)為陽(yáng)性。多不溶血，多液化明膠，G+C多為35mol%。,致病性與毒力因子,本菌是雛鴨傳染性漿膜炎的病原菌?？梢?-8周齡、尤其2-3周齡雛鴨大批發(fā)病、死亡，生長(zhǎng)發(fā)育嚴(yán)重受阻。也從患敗血癥的雞、鵝、火雞、野生水禽分離。兔和小鼠不易感。豚鼠腹腔注射大量細(xì)菌可致死。,微生物學(xué)診斷,取發(fā)病初期病鴨的腦及心血，用巧克力培養(yǎng)基容易分離到本菌。肝、脾分離率低，

23、僅10%左右。分離時(shí)應(yīng)同時(shí)接種麥康凱培養(yǎng)基，以便及時(shí)區(qū)別大腸桿菌。分離的細(xì)菌應(yīng)進(jìn)行葡萄糖和蔗糖發(fā)酵試驗(yàn)，也可接種小鼠，與多殺性巴氏菌相區(qū)別。PCR法可用作快速診斷。,三、嗜血桿菌屬：副豬嗜血桿菌,副豬嗜血桿菌病，也寫(xiě)作豬副嗜血桿菌病，又稱格拉澤氏病或革拉澤氏病。引起的豬的疾病，表現(xiàn)為豬的纖維性多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、胸膜炎和腦膜炎等。,,血清型,根據(jù)熱穩(wěn)定抗原的差異可將本菌分為至少15個(gè)血清型，約25%分離株無(wú)法定型，優(yōu)勢(shì)菌型為4型

24、及5型。不同血清型毒力存在差異，1、5、10、12、13及14型為高毒力，2、4、8、15為中毒力，其它血清型視為無(wú)毒力。但同一血清型的不同菌株毒力可不同。,1.形態(tài)及染色,多為短桿狀，也有呈球、桿狀或長(zhǎng)絲狀等多形性。大小為1.5×0.3-0.4?m。多單個(gè)、也有短鏈排列。無(wú)鞭毛，無(wú)芽胞，新分離的致病菌株有莢膜。美蘭染色呈兩極，革蘭染色為陰性。,2.培養(yǎng)及生化特性,初次分離培養(yǎng)時(shí)供給5%-10%CO2可促進(jìn)生長(zhǎng)。生長(zhǎng)需供

25、給X因子和V因子。X因子是血紅蛋白中的血紅素及其衍生物V因子為輔酶Ⅰ即煙酰胺腺嘌噙二核苷酸（NAD）或輔酶Ⅱ血液中的V因子一般處于被抑制狀態(tài)，將鮮血瓊脂加熱80-90℃，5-15min，制成巧克力培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的抑制物被破壞，釋出V因子。,,3.致病性及毒力因子多發(fā)性漿膜炎等4.微生物學(xué)診斷TSA分分離，PCR鑒定等,四、放線桿菌屬：豬胸膜肺炎放線桿菌,本菌舊稱豬胸膜肺炎嗜血桿菌或副溶血嗜血桿菌但DNA雜交試驗(yàn)表明，本

26、菌與林氏放射桿菌有很高的同源性，因此自1983年起改為現(xiàn)名，并劃歸放線桿菌屬。本菌引致豬傳染性胸膜肺炎，是集約化豬場(chǎng)常見(jiàn)豬病之一。,1.形態(tài)及染色,小球桿菌，具多形性。新鮮病料呈兩極染色，有莢膜和鞭毛，具運(yùn)動(dòng)性。兼性厭氧，置10％ CO2中可長(zhǎng)出粘液性菌落。最適生長(zhǎng)溫度37℃。在普通營(yíng)養(yǎng)基不長(zhǎng)，需添加V因子常用巧克力培養(yǎng)基培養(yǎng)。在綿羊血平板上，可產(chǎn)生穩(wěn)定的β溶血，金黃色葡萄球菌可增強(qiáng)其溶血圈（CAMP試驗(yàn)陽(yáng)性）,CAMP試驗(yàn),

27、3.致病及毒力因子,,微生物學(xué)診斷,取病死豬肺壞死組織、胸水、鼻及氣管滲出物作涂片，顯微鏡檢查是否有革蘭陰性兩極染色的球桿菌。確診需取上述病料接種巧克力瓊脂或綿羊血瓊脂，置5% CO2 37℃越夜培養(yǎng)。如有溶血小菌落生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)一步作CAMP試驗(yàn)，。近年來(lái)則采用PCR法，檢測(cè)莢膜合成相關(guān)基因等，可達(dá)快速診斷和定型。,第4節(jié) 革蘭氏陰性需氧桿菌,布魯氏菌屬---布魯氏菌伯氏菌屬---鼻疽伯氏菌波氏菌屬---支氣管敗血波氏菌,胞內(nèi)菌的

28、基本概念,根據(jù)病原菌與宿主細(xì)胞的關(guān)系，病原菌分為胞外菌和胞內(nèi)菌兩類。胞外菌是指可以在宿主細(xì)胞外的細(xì)胞間隙、血液、淋巴液、組織液等體液中生長(zhǎng)繁殖的細(xì)菌。胞內(nèi)菌又分兩種，即兼性胞內(nèi)菌和專性胞內(nèi)菌。兼性胞內(nèi)菌是指在宿主體內(nèi)，主要寄居在細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)繁殖，在體外無(wú)活細(xì)胞的培養(yǎng)基中亦可生長(zhǎng)。專性胞內(nèi)菌則不論在體內(nèi)體外，都必須在活細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)繁殖,一、布氏桿菌屬：布氏桿菌,有羊、牛、豬、鼠、綿羊和犬6個(gè)種，20個(gè)生物型。是引起多種動(dòng)物和人發(fā)病的病原

29、。,1.形態(tài)與染色,球桿狀，無(wú)鞭毛，不形成芽孢。革蘭氏陰性。,2.培養(yǎng)及生化特性,此屬細(xì)菌專性需氧，但許多菌株，尤其是在初代分離培養(yǎng)時(shí)尚需5%-10% CO2。最適生長(zhǎng)溫度37℃，最適pH為6.6-7.4。泛酸鈣和內(nèi)消旋赤蘚糖醇可刺激某些菌株生長(zhǎng)。大多數(shù)菌株在初次培養(yǎng)時(shí)生長(zhǎng)緩慢，在48h內(nèi)罕見(jiàn)形成菌落，常需5-10d甚至20-30d，但實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期傳代保存的菌株，培養(yǎng)48-72h即可生長(zhǎng)良好。,普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)緩慢；在含有3~5%的

30、甘油或血液、血清、葡萄糖的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)更好；菌落特點(diǎn)甘油瓊脂：細(xì)小、光滑、圓形、濕潤(rùn)、粘稠的灰白色漸至灰黃色菌落血瓊脂：不溶血馬鈴薯培養(yǎng)基：蜂蜜狀粘稠菌苔，顏色由淡黃色→淡褐色→深褐色；對(duì)鑒定有價(jià)值孔雀綠酸性復(fù)紅培養(yǎng)基上，形成淡綠色菌落麥康凱上不能生長(zhǎng),,在液體培養(yǎng)基中呈輕微渾濁生長(zhǎng)，無(wú)菌膜。但培養(yǎng)日久，可形成菌環(huán)，有時(shí)形成厚的菌膜；在固體培養(yǎng)基上，菌落可以分為光滑（S）型菌落粗糙（R）型菌落粘膠狀的粘液（M）型菌落

31、,3致病性和毒力因子,將本屬分為該屬現(xiàn)包括6個(gè)種20個(gè)生物型，馬爾他布氏桿菌（Br.melitensis）生物型1~3、流產(chǎn)布氏桿菌（Br.abortus）生物型1~9豬布氏桿菌（Br.suis）生物型1~5綿羊布氏桿菌（Br.ovis）沙林鼠布氏桿菌（Br.neotomae）犬布氏桿菌（Br.canis）6個(gè)種。,毒力差異,在不同種別和生物型，甚至同型細(xì)菌的不同菌株之間毒力差異明顯。對(duì)豚鼠的致病性順序是馬爾他布氏桿菌≥

32、豬布氏桿菌≥流產(chǎn)布氏桿菌＞沙林鼠布氏桿菌≥犬布氏桿菌＞綿羊布氏桿菌。,引致多種動(dòng)物和人的布氏桿菌病。細(xì)菌可經(jīng)氣溶膠傳播，是潛在的生物武器。本菌不產(chǎn)生外毒素，但有毒性較強(qiáng)的內(nèi)毒素。光滑型的流產(chǎn)布氏桿菌入侵機(jī)體粘膜屏障后，被吞噬細(xì)胞吞噬成為胞內(nèi)寄生菌，并在淋巴結(jié)生長(zhǎng)繁殖形成感染灶。潛伏期2周至7個(gè)月，一旦侵入血流，則出現(xiàn)菌血癥，由于內(nèi)毒素的作用致使機(jī)體發(fā)熱。之后細(xì)菌定位于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)、乳腺及生殖器官。在妊娠中期，細(xì)菌在富含赤蘚醇的

33、胎盤(pán)絨毛膜及其周邊大量繁殖，導(dǎo)致壞死性胎盤(pán)炎，致使孕畜流產(chǎn)。,,4.微生物學(xué)診斷,鑒于布氏桿菌病有可能由實(shí)驗(yàn)室感染所致，所以發(fā)達(dá)國(guó)家規(guī)定凡涉及本菌的樣本檢測(cè)，均應(yīng)在生物安全2級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，凡涉及本菌的培養(yǎng)，則需在生物安全3級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)操作。布氏桿菌病常表現(xiàn)為慢性或隱性感染，其診斷和檢疫主要依靠血清學(xué)檢查及變態(tài)反應(yīng)檢查。細(xì)菌學(xué)檢查僅用于發(fā)生流產(chǎn)的動(dòng)物和其它特殊情況。,（1）細(xì)菌學(xué)檢查,病料最好用采集流產(chǎn)胎兒的胃內(nèi)容物、肺、肝和脾以及流產(chǎn)胎

34、盤(pán)和羊水等。也可采用陰道分泌物、乳汁、血液、精液、尿液以及急宰病畜的子宮、乳房、精囊、睪丸、附睪、淋巴結(jié)、骨髓和其它有局部病變的器官。顯微鏡檢查 病料可直接涂片染色鏡檢，作革蘭氏和柯茲洛夫斯基染色鏡檢。,（2）分離培養(yǎng)鑒定,無(wú)污染病料:可直接劃線接種于前述適宜培養(yǎng)基，污染病料:則應(yīng)接種到加有放線菌酮0.1mg/ml、桿菌肽25 IU/ml、多粘菌素B 6 IU/ml和加有色素的選擇性瓊脂平板。均一式接兩套份，分別置大氣環(huán)境及5%

35、~10% CO2環(huán)境，37℃培養(yǎng)。每3d觀察一次，如有細(xì)菌生長(zhǎng)，可挑選可疑菌落做細(xì)菌鑒定；如無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，可繼續(xù)培養(yǎng)至30d后，仍無(wú)生長(zhǎng)者方可認(rèn)為陰性。挑選可疑菌落，做涂片、染色和鏡檢，確定為疑似菌后進(jìn)行純培養(yǎng)，再以布氏桿菌抗血清（高免血清或A、M單相血清，如不凝時(shí)，可再用R血清）作玻片凝集試驗(yàn)。PCR法作快速診斷。,（3）血清學(xué)檢查,有多種檢查方法，歸納起來(lái)不外乎血清中布氏桿菌抗體檢查和病料中布氏桿菌檢查兩類方法。用已知抗體可檢查

36、病料中是否存在布氏桿菌，或分離培養(yǎng)物是否為布氏桿菌，比細(xì)菌學(xué)檢查法簡(jiǎn)便快速，因而具有較大實(shí)用價(jià)值。熒光抗體技術(shù)反向間接血凝試驗(yàn)間接炭凝集試驗(yàn)免疫酶組化法染色動(dòng)物在感染布氏桿菌7~15d可出現(xiàn)抗體，檢測(cè)血清中的抗體是布氏桿菌病診斷和檢疫的主要手段。,（4）變態(tài)反應(yīng)檢查,皮膚變態(tài)反應(yīng)一般在感染后的20~25d出現(xiàn)，因此不適宜作早期診斷。本法適于動(dòng)物綿羊和山羊及豬的大群檢疫，主要用于綿羊和山羊，其次為豬。檢測(cè)時(shí)，將布氏桿菌水解素

37、0.2ml注射于羊尾根皺襞部或豬耳根部皮內(nèi)，24及48h后各觀察反應(yīng)一次。若注射部發(fā)生紅腫，即判為陽(yáng)性反應(yīng)。,二、伯氏菌屬---鼻疽伯氏菌,鼻疽伯氏菌舊名鼻疽假單胞菌，為馬、騾、驢等單蹄獸鼻疽的病原，也能感染人，其他家畜和多種野生動(dòng)物，是一種人獸共患的重要病原。,,1.形態(tài)與染色：革蘭氏陰性2.培養(yǎng)及生化特性：專性需氧3.致病性及毒力因子：馬屬動(dòng)物，人可感染4.微生物學(xué)診斷：變態(tài)反應(yīng)；生物安全等級(jí)3級(jí)；血清學(xué)檢查,三、波氏桿菌

38、：支氣管敗血波氏菌,最初從犬中分離，可感染多種哺乳動(dòng)物1.形態(tài)與染色：革蘭氏陰性2.培養(yǎng)及生化特性3.致病性及毒力因子： 犬傳染性支氣管炎4.微生物學(xué)診斷：細(xì)菌學(xué)檢查；血清學(xué)檢查。,第5節(jié) 革蘭氏陽(yáng)性無(wú)芽孢桿菌,李氏桿菌屬---產(chǎn)單核細(xì)菌李氏桿菌 可引起人和動(dòng)物的李氏桿菌病。,,1.形態(tài)與染色： 革蘭氏陽(yáng)性，無(wú)芽孢2.培養(yǎng)及生化特性 培養(yǎng)基上長(zhǎng)成露滴狀小菌落， β型溶血3.致病性及毒力因子 多種動(dòng)物

39、感染，敗血癥，流產(chǎn)等4.微生物學(xué)診斷增菌后分離培養(yǎng)；動(dòng)物試驗(yàn)：小鼠；血清學(xué)鑒定,第6節(jié) 革蘭氏陽(yáng)性產(chǎn)芽孢桿菌,芽孢桿菌屬---炭疽芽孢桿菌梭菌屬---產(chǎn)氣莢膜桿菌,一、芽孢桿菌屬---炭疽芽孢桿菌,1.形態(tài)與染色 菌體兩端平切，培養(yǎng)基中呈竹節(jié)狀，革蘭氏陽(yáng)性。2.培養(yǎng)及生化特性 粗糙型菌落3.致病性及毒力因子 是引起人和各種動(dòng)物炭疽的病原。4.微生物學(xué)診斷 嚴(yán)禁解剖,二、梭菌屬---產(chǎn)氣莢膜桿菌,曾稱為魏

40、氏梭菌。1.形態(tài)與染色2.培養(yǎng)及生化特性3.致病性及毒力因子 A型菌引起人氣性壞疽和食物中毒；B型菌引起羔羊痢疾；C型菌引起綿羊猝疽等；D引起羔羊等敗血癥；E引起犢牛、羔羊腸毒血癥。4.微生物學(xué)診斷,第7節(jié) 分枝桿菌屬,牛分枝桿菌副結(jié)核分枝桿菌,,本屬菌許多是人和多種動(dòng)物的病原菌。對(duì)動(dòng)物有致病性的主要是結(jié)核分枝桿菌牛分枝桿菌禽分枝桿菌副結(jié)核分枝桿菌,一、牛分枝桿菌（M. bovis）,本菌與人的結(jié)核分枝桿菌（M

41、. tuberculosis，簡(jiǎn)稱結(jié)核桿菌）和禽分枝桿菌（M. avium ）許多特性相近，,Cycle of Mycobacterium bovis transmission between cattle and humans. The thickness of the arrows suggests probability. Adapted from Collins and Grange (1987).,1.形態(tài)與染色,結(jié)核分枝桿菌

42、為細(xì)長(zhǎng)、直或微彎的桿菌，單在、少數(shù)成叢，大小為0.2～0.5×1.5～4.0μm。牛分枝桿菌菌體較短而粗，禽分枝桿菌呈多形性。在陳舊的培養(yǎng)基或干酪性病灶內(nèi)的菌體可見(jiàn)分枝現(xiàn)象。與一般革蘭陽(yáng)性菌不同，本菌的細(xì)胞壁不僅有肽聚糖，還有特殊的糖脂。糖脂成份有效地刺激哺乳動(dòng)物的免疫系統(tǒng)，分枝桿菌因此被制成免疫佐劑得到普遍應(yīng)用，著名的弗氏佐劑（Freund’s adjuvant）即是例證。,2.培養(yǎng)與生化特性,本菌為專性需氧菌，對(duì)營(yíng)養(yǎng)

43、要求嚴(yán)格，最適pH 6.4～7.0，最適溫度為37℃～37.5℃，在30℃～34℃可生長(zhǎng)；低于30℃或高于42℃均不生長(zhǎng)，但禽分枝桿菌可在42℃生長(zhǎng)。在添加特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基上才能生長(zhǎng)，但生長(zhǎng)緩慢，特別是初代培養(yǎng)，一般需10～30d才能看到菌落。,3.致病性及毒力因子,致病過(guò)程以細(xì)胞內(nèi)寄生和形成局部病灶為特點(diǎn)。細(xì)菌主要通過(guò)呼吸道侵入機(jī)體肺泡，被巨噬細(xì)胞吞噬，但不被消化降解，相反在其內(nèi)繁殖，形成病灶，產(chǎn)生干酪樣壞死。壞死灶被吞噬

44、細(xì)胞、T細(xì)胞與B細(xì)胞等包圍，形成結(jié)核結(jié)節(jié)。,,牛分枝桿菌主要引起牛結(jié)核病，其他家畜、野生反芻動(dòng)物、人、靈長(zhǎng)目動(dòng)物、犬、貓等肉食動(dòng)物均可感染。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中豚鼠、兔有高度敏感性。對(duì)倉(cāng)鼠、小鼠有中等致病力，對(duì)家禽無(wú)致病性。,4.微生物學(xué)診斷,顯微鏡檢查 取患病器官的結(jié)核結(jié)節(jié)及病變與非病變交界處組織直接涂片，抗酸染色后鏡檢，如發(fā)現(xiàn)紅色成叢桿菌時(shí)，可做出初步診斷。分離培養(yǎng) 將病料中加入6％ H2SO4或4％ NaOH液處理15min后，經(jīng)

45、中和、離心，取少許沉淀物接種在培養(yǎng)基斜面上，每份病料接4～6管，管口封嚴(yán)，置37℃培養(yǎng)8周，每周觀察一次，培養(yǎng)陽(yáng)性時(shí)，需進(jìn)行培養(yǎng)特性和生化特性鑒定。,,動(dòng)物接種 將上述經(jīng)處理的供分離培養(yǎng)用的病料接種于動(dòng)物，皮下或腹腔注射0.5ml，禽分枝桿菌可使雞致??；結(jié)核桿菌對(duì)豚鼠有較強(qiáng)的致病性，皮下注射3～5周可引起明顯病變；牛分枝桿菌對(duì)兔有致病性，接種后3周至3個(gè)月死亡。,,變態(tài)反應(yīng) 臨床上最廣泛應(yīng)用的是遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)，即結(jié)核菌素試驗(yàn)

46、，采用PPD皮內(nèi)注射法，按我國(guó)《動(dòng)物檢疫操作規(guī)程》規(guī)定，牛頸部皮內(nèi)注射0.1ml（10萬(wàn)IU／ml）72h后局部炎癥反應(yīng)明顯，皮腫脹厚度差≥4mm為陽(yáng)性；如局部炎癥不明顯，皮腫脹厚度差在2～4mm間，為疑似；如無(wú)炎癥反應(yīng)，皮膚腫脹厚度差在2mm以下，為陰性。凡判為疑似反應(yīng)牛，30d后需復(fù)檢一次，如仍為疑似，經(jīng)30～45d再次復(fù)檢，如仍為疑似可判為陽(yáng)性。,,血清學(xué)檢查 鑒于結(jié)核病細(xì)胞免疫與體液免疫的分離現(xiàn)象，抗體陽(yáng)性意味著

47、病情惡化，正處于感染活動(dòng)期，檢測(cè)特異性抗體可診斷結(jié)核病。 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是目前檢測(cè)抗體的較好方法，決定ELISA特異性的關(guān)鍵是選擇結(jié)核桿菌特異性診斷抗原。PCR 廣泛應(yīng)用于于分離菌株及結(jié)核病人的臨床樣本（痰液）的檢測(cè)，特異性強(qiáng)而且快速。,二、副結(jié)核分支桿菌,引起反芻動(dòng)物慢性消耗性傳染病。1.形態(tài)與染色2.培養(yǎng)及生化特性3.致病性及毒力因子4.微生物學(xué)診斷：分離培養(yǎng)，變態(tài)反應(yīng)；抗體檢測(cè),第8節(jié) 螺旋體,豬

48、痢短螺旋體1.形態(tài)與染色：存在2-4個(gè)彎曲；2.培養(yǎng)及生化特性：嚴(yán)格厭氧；3.致病性及毒力因子：引起豬痢疾，又名血痢、黑痢。4.微生物學(xué)診斷,第9節(jié) 支原體,一、雞毒支原體，又名禽敗血支原體。1.形態(tài)與染色2.培養(yǎng)及生化特性3.致病性及毒力因子：感染雞和火雞，4.微生物學(xué)診斷：難以分離培養(yǎng)。,二、豬肺支原體，1.形態(tài)與染色2.培養(yǎng)及生化特性3.致病性及毒力因子：只感染豬，引起豬喘氣病。4.微生物學(xué)診斷,,三、牛支