甜瓜主要病原菌的鑒定與抗病基因的分子定位.pdf

1、甜瓜(Cucumis melo L.)是深受世界各地人民喜愛的一種高檔瓜果之一。在整個(gè)生育時(shí)期中遭到多種病蟲害的侵襲。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活的提高，近年來，甜瓜栽培面積，尤其是保護(hù)地栽培取得了長足的發(fā)展，然而，在甜瓜生產(chǎn)蓬勃發(fā)展的勢頭中，還存在許多問題。連作重茬是影響甜瓜生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展的重要問題之一。由于連作重茬造成十傳病害加劇，影響了果品產(chǎn)量與品質(zhì)的提高。篩選抗源、培育和推廣抗病品種是防治甜瓜病害最經(jīng)濟(jì)有效的措施。本文針對甜瓜主要病

2、害(蔓枯病、枯萎病和白粉病)，展開病原與抗源鑒定、抗源抗性遺傳分析以及抗病基因的分子定位研究，取得結(jié)果如下：
　　 1.按照柯赫氏法則，成功分離、純化和鑒定了甜瓜蔓枯病、枯萎病病原，鑒定結(jié)果表明甜瓜蔓枯病病原菌(Didymella bryoniae(Auersw.)Rehm)屬半知菌亞門，球殼孢目，殼二孢屬；甜瓜枯萎病病原菌為尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum.f.sp.melonis)。屬半知菌類(Fungiimp

3、erfecti)，瘤座孢科(Tubercular)，鐮刀菌屬(fusarium)，經(jīng)致病性測定及再分離研究，病原菌的形態(tài)特征與前人的研究結(jié)果一致。
　　 2.蔓枯病菌絲體不易在培養(yǎng)基上直接產(chǎn)生分生孢子，為此，采用紫外照射和熱激處理兩種逆境脅迫的方法，高效誘導(dǎo)分生孢子，結(jié)果表明在PSA平板上生長茂盛的蔓枯病菌絲體紫外照射2和4min，15d后各處理均產(chǎn)生較多的分生孢子器。熱激處理效果更好，對生長茂盛的菌絲體分別用35℃-45℃的高

4、溫處理1d、2d、3d，各個(gè)處理均能產(chǎn)生人量分生孢子器，說明適宜的熱激條件可有效誘導(dǎo)分生孢子器的產(chǎn)生。將分生孢子器接種在OA培養(yǎng)基上短期內(nèi)能快速擴(kuò)繁出新的分生孢子器。甜瓜枯萎病病菌的分生孢子采用PD培養(yǎng)液振蕩誘導(dǎo)效果較好。
　　 3.本研究建立了甜瓜干種子基因組DNA提取方法，結(jié)果表明提取的DNA中RNA消化徹底，稀釋100倍DNA濃度達(dá)30ng/ul左右，可以直接用于Fom2-SCAR標(biāo)記反應(yīng)體系的PCR擴(kuò)增。
　　

5、4.利用葉片離體接種和Fom2-SCAR標(biāo)記鑒定技術(shù)，從92份中國香瓜種質(zhì)資源中發(fā)掘了63份枯萎病抗源；采用上胚軸針刺接種方法從100份中國香瓜種質(zhì)資源中篩選出了11份蔓枯病抗源，其中包括2份高抗抗源。
　　 5.以雜交組合4G21/3A832的F3家系及其雙親、F1、BCs和BCr為材料，利用葉片離體接種鑒定技術(shù)，分析了蔓枯病抗源4G21的抗性遺傳規(guī)律，結(jié)果表明：F1抗性水平低于抗病親本，表明抗病基因在F1表現(xiàn)為顯性。BCs抗

6、感分離比為1∶1，F(xiàn)3家系抗感分離比為3∶1，經(jīng)x2測驗(yàn)表明：F2群體蔓枯病抗性由一對部分顯性單基因控制。將該基因命名為Sb-x，利用本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的甜瓜基因組分子圖譜，直接將Sb-x定位于LG1連鎖群上，Sb-x與標(biāo)記位點(diǎn)me45em42-4、me45em2-3、me45em2-4和me3em42-4、me3em42-3緊密連鎖，其遺傳距離分別為2cM利3cM。
　　 6.以抗感交組合C12/3B13的6個(gè)世代(雙親、F1、F2

7、、F3、BCs和BCr)為材料，利用葉片離體接種抗性鑒定技術(shù)，分析了甜瓜白粉病抗源3B13的抗性遺傳規(guī)律，結(jié)果表明：F1抗性水平接近于抗病親本，表現(xiàn)為抗病，表明抗病基因在F1表現(xiàn)為部分顯性；BCs抗感分離比為1∶1，F(xiàn)2抗感分離比為3∶1，x2測驗(yàn)表明：抗源3B13對白粉病菌的抗性由1對部分顯性基因控制。利用本研究室構(gòu)建的分子圖譜，借助SSR標(biāo)記，進(jìn)行圖譜黎合，結(jié)果將甜瓜白粉病抗源3B13攜帶的抗病基因勵(lì)Pm-x位點(diǎn)定位于LG3連鎖群。