北方玉米絲軸黑粉菌的遺傳多樣性評價(jià)及GFP基因在病理學(xué)研究中的應(yīng)用.pdf

1、本研究利用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)分析了北方玉米絲軸黑粉菌的遺傳多樣性和遺傳分化，建立了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玉米絲軸黑粉菌的遺傳轉(zhuǎn)化體系，將外源gfp加基因?qū)胗衩捉z軸黑粉菌并成功表達(dá)。獲得的主要結(jié)果如下：
　　 1.篩選出26個擴(kuò)增穩(wěn)定、帶紋清晰的RAPD引物，對從玉米絲黑穗病發(fā)生嚴(yán)重的大部分北方省市收集分離的68個玉米絲軸黑粉菌菌株進(jìn)行了DNA遺傳多樣性分析，結(jié)果表明，RAPD譜帶多態(tài)性為98.33％，北方玉米絲軸黑

2、粉菌具有豐富的遺傳多樣性，遺傳分化明顯；種群內(nèi)遺傳變異小于種群間遺傳變異。玉米絲軸黑粉菌遺傳分化除明顯受地理阻隔影響外，也可能與玉米種子調(diào)運(yùn)過程中攜帶病菌基因的遺傳遷移相關(guān)。
　　 2.利用NTSYS軟件進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析表明，相似系數(shù)為0.76閥值時，68個菌株可劃分為13個類群。研究結(jié)果完善和豐富了我國玉米絲軸黑粉菌遺傳多樣性評價(jià)研究，對玉米抗病資源篩選和抗病育種具有重要參考價(jià)值。
　　 3.構(gòu)建帶有報(bào)告基因gfp的重

3、組雙元質(zhì)粒載體pCAMBIA0611，利用熱擊法導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌，并成功實(shí)現(xiàn)了對玉米絲軸黑粉菌的轉(zhuǎn)化。
　　 4.對不同的根癌農(nóng)桿菌菌株、不同的玉米絲軸黑粉菌擔(dān)孢子成熟度、不同的根癌農(nóng)桿菌濃度等轉(zhuǎn)化條件的比較研究，建立了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玉米絲軸黑粉菌的遺傳轉(zhuǎn)化體系，結(jié)果表明根癌農(nóng)桿菌GV3101介導(dǎo)，玉米絲軸黑粉菌擔(dān)孢子在CM中培養(yǎng)3d，根癌農(nóng)桿菌菌液OD600值為0.4左右時，轉(zhuǎn)化效率最高，能達(dá)到280個轉(zhuǎn)化子/106個細(xì)胞。<

4、br>　　 5.將轉(zhuǎn)化菌株與野生型菌株混合于PD液體中搖床培養(yǎng)，顯微鏡檢發(fā)現(xiàn)兩者能彼此結(jié)合，產(chǎn)生雙核菌絲。說明外源基因的插入沒有導(dǎo)致與交配結(jié)合相關(guān)的基因發(fā)生突變。
　　 6.利用注射法將結(jié)合的雙核菌液接種于玉米自交系黃早四，二葉一心期PCR檢測葉片表明轉(zhuǎn)化菌株侵入到玉米葉片中，說明轉(zhuǎn)化菌株對玉米具有一定的侵染力。成熟期田間能觀察到發(fā)病植株，并有玉米絲軸黑粉菌冬孢子產(chǎn)生，表明轉(zhuǎn)化菌株具有一定的致病性，侵染植株后能導(dǎo)致發(fā)病。