稻瘟病菌中一個假定的Rab族蛋白RAB8之功能分析.pdf

1、Rab族蛋白是小G蛋白Ras家族最大的亞家族，研究表明它主要參與細胞內的泡囊運輸，調節(jié)生物體內各種蛋白在細胞內外的正確運輸和分配，在真菌的生長發(fā)育過程中起到關鍵的作用。 本研究試圖了解稻瘟病菌中Rab族蛋白的功能。首先，利用稻瘟病菌的數(shù)據(jù)庫和相關生物信息學軟件分析，結果表明在稻瘟病菌基因組中預測有10個Rab蛋白亞家族成員，這些Rab亞家族成員都具有其保守的結構域并且與其它物種間的Rab族蛋白存在著高度的同源性。然后，根據(jù)Rab

2、家族成員的核酸序列設計引物，利用同源重組的原理構建基因敲除突變體，并對其進行Southern雜交和RT-PCR驗證，結果得到一個具有代表性的Rab亞家族成員Rab8(Mgg06135.5)的敲除突變體。對該突變體進行表型分析，發(fā)現(xiàn)該突變體的菌絲較野生菌株有少許變粗，菌絲生長速度明顯減慢；產(chǎn)孢量顯著降低，分生孢子形態(tài)正常但有少許膨大，仍可以正常萌發(fā)并成功侵入洋蔥表皮細胞；用其孢子液接種水稻葉片，病斑數(shù)顯著減少，病情指數(shù)降低，致病能力減弱。