肺癌功能性抗原的分離鑒定及其與肺癌臨床相關(guān)性研究.pdf

1、目的：采用功能性抗體庫(kù)技術(shù)已篩選出的抗肺癌單抗13C9，確定其識(shí)別的抗原在肺癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)，測(cè)定該單抗抑制肺癌生長(zhǎng)的能力，進(jìn)一步鑒定其識(shí)別的抗原蛋白。研究該抗原蛋白的表達(dá)與肺癌臨床參數(shù)的關(guān)系，以期為肺癌靶向治療提供有價(jià)值的分子靶位和治療劑。
　　 方法：采用細(xì)胞免疫熒光、免疫組織化學(xué)檢測(cè)13C9單抗識(shí)別的抗原蛋白在肺癌細(xì)胞及組織中的表達(dá)和定位；ELISA測(cè)定13C9單抗的產(chǎn)量和亞型；裸鼠體內(nèi)移植瘤治療實(shí)驗(yàn)和體外肺癌細(xì)胞增殖

2、實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)13C9單抗對(duì)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用；采用斑點(diǎn)雜交優(yōu)化、RIPA法提取13C9單抗識(shí)別的抗原蛋白，行蛋白印跡(Western blotting)、免疫沉淀、MALDI-TOF-PMF質(zhì)譜技術(shù)，鑒定該抗原蛋白。收集臨床肺癌標(biāo)本，應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)M蛋白的表達(dá)，分析其與肺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)13C9單抗識(shí)別的抗原在肺癌12種固定細(xì)胞中表達(dá)陽(yáng)性率達(dá)90％以上，強(qiáng)度為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)；在活細(xì)胞中

3、，其識(shí)別的抗原表達(dá)于細(xì)胞膜上。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果：174例配對(duì)組織中，13C9單抗識(shí)別的抗原在肺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率87.4％，在配對(duì)癌旁組織中陽(yáng)性表達(dá)率16.7％，差異非常顯著(t=3.5555E48，P<0.01)。培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生13C9單抗，ELISA測(cè)定其產(chǎn)量為4.38ug/ml，亞型為小鼠lgM、K型。裸鼠體內(nèi)移植瘤抑制實(shí)驗(yàn)，13C9單抗抑瘤率達(dá)63.29％，與對(duì)照組比較，差異顯著(P=0.01，P<0.05)。斑點(diǎn)雜交優(yōu)

4、化13C9單抗識(shí)別的抗原蛋白主要定位于細(xì)胞膜，經(jīng)RIPA法提取、免疫沉淀、電泳后切膠行MALDI-TOF-PMF質(zhì)譜技術(shù)鑒定，結(jié)果13C9單抗識(shí)別的抗原蛋白為M蛋白，分子量為226KD。商業(yè)化抗體進(jìn)行質(zhì)譜結(jié)果回證，證明13C9單抗與商業(yè)化的抗體識(shí)別的抗原蛋白同為M蛋白。對(duì)于肺癌臨床標(biāo)本的免疫組織化學(xué)檢測(cè)及其與肺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性的分析結(jié)果顯示，在331例肺癌組織中，M蛋白的表達(dá)在鱗癌組織高于在腺癌組織(P=0.000，P

5、，在T3+T4期肺組織高于TI+T2期肺組織(P=0.001，P<0.01)。在161例鱗癌中M蛋白的表達(dá)隨T分期的增加而增強(qiáng)；在137例腺癌中M蛋白的表達(dá)隨分化程度的減低而增強(qiáng)。
　　 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：①13C9單抗為功能性單抗，其識(shí)別的抗原在肺癌多種細(xì)胞和組織中表達(dá)，對(duì)裸鼠體內(nèi)移植瘤具有明顯的抑制作用。②13C9單抗識(shí)別的抗原M蛋白為肺癌功能性抗原蛋白，分子量為226KD，主要定位于肺癌細(xì)胞膜。③M蛋白的表達(dá)與肺癌的類(lèi)