尿酸鹽晶體形態(tài)學及果糖對尿酸轉(zhuǎn)運子影響的研究.pdf

1、目的：
　　 1.尿酸鹽晶體是引起痛風性關(guān)節(jié)炎急性發(fā)作的物質(zhì)基礎(chǔ)，通過觀察尿酸鹽晶體在不同pH值環(huán)境中的形態(tài)變化，探討體液及尿液pH值對防止尿酸結(jié)石的形成和促進體內(nèi)尿酸排出的意義。
　　 2.尿尿酸鹽晶體是尿酸在尿液中處于過飽和狀態(tài)的標志，通過檢測痛風患者尿液尿酸鹽結(jié)晶，探討痛風患者尿液尿酸鹽結(jié)晶對痛風早期診斷和評價病情的臨床意義。
　　 3.hURAT1基因是調(diào)節(jié)腎臟尿酸重吸收的重要基因，通過觀察不同濃度的果糖

2、對腎小管上皮細胞（HK-2細胞）hURAT1基因mRNA表達的影響，探討果糖影響尿酸排泄的途徑。
　　 方法：
　　 1.采集痛風病人痛風結(jié)節(jié)中的尿酸鹽晶體，應(yīng)用偏振光顯微鏡觀察晶體形態(tài)，以證實其結(jié)晶為尿酸鹽結(jié)晶。將尿酸鹽晶體200ul置于試管中，加pH值為5.5的緩沖液，調(diào)尿酸濃度為8.0 mg/dl，37℃水浴30分鐘，在偏振光顯微鏡下，觀察尿酸鹽晶體在此pH值環(huán)境下的形態(tài)。以同樣的方法，依次從弱酸至弱堿加入pH值分

3、別為5.7、6.1、6.5、7.2、7.6、8.0的磷酸鹽緩沖液，觀察尿酸鹽晶體在不同的pH值環(huán)境下的形態(tài)變化。
　　 2.選擇痛風患者56例，B超顯示無腎結(jié)石，健康對照23例。分別采集其晨尿50ml，離心取其沉渣，應(yīng)用偏振光顯微鏡觀察尿沉渣中的尿酸鹽結(jié)晶形態(tài)。
　　 3.按照培養(yǎng)液中所含不同的果糖濃度，將HK-2細胞培養(yǎng)組分為：①單純用DMEM/F12培養(yǎng)基組（對照組）：②采用DMEM/F12培養(yǎng)基+100μmol果糖

4、組（F1組）：③采用DMEM/F12培養(yǎng)基+500μmol果糖組（F2組）。每組分別培養(yǎng)8瓶細胞，在不同培養(yǎng)液里分別培養(yǎng)48小時。應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測HK-2細胞里hURAT1mRNA的相對表達量。
　　 結(jié)果：
　　 1.尿酸鹽晶體在pH值5.5-6.1的酸性條件下呈針狀，有聚集現(xiàn)象；隨著pH值的提高，在pH6.5-7.6時，晶體針狀趨于變小，并分散于液體中；在pH值8.0的堿性條件下晶體變?yōu)轭w粒狀，甚至溶解。<

5、br>　　 2.痛風患者56例，尿液中檢測到尿酸鹽晶體者54例（96.43％），呈短針狀或繁星狀；健康對照23例，檢測到尿酸鹽晶體2例（8.7％），呈繁星狀；兩組檢出率有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　 3.所有培養(yǎng)組都可以檢測到hURAT1mRNA的表達，且F1組的hURAT1mRNA表達量為對照組的146.696，F(xiàn)2組為對照組的178.5％。F1、F2兩組與對照組之間的差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），F(xiàn)1、F2兩組間

6、的差異也有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.當體液pH值呈弱酸并趨于堿性時，尿酸晶體變?。划攑H值在7.0左右時，既不破壞腎臟的生理環(huán)境，又有可能阻止高尿酸血癥和痛風病人尿酸鹽腎臟沉積和腎結(jié)石的形成，并且促進尿酸排出。
　　 2.尿液尿酸鹽結(jié)晶的檢測對痛風的診斷具有臨床意義。盡管B超檢查未顯示有腎結(jié)石，但尿中尿酸結(jié)晶呈陽性，提示存在尿酸腎結(jié)石形成和尿酸對腎臟損傷的風險，同時可以指導合理選擇降尿