尿酸鹽晶體通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)成骨前體細(xì)胞生長及其分化的影響.pdf

1、目的：觀察尿酸鹽晶體（MSU）對(duì)成骨前體細(xì)胞（3T3-E1）生長、分化過程的影響，并探討其與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的關(guān)系。
　　方法：
　　1.配置尿酸鹽晶體（MSU），并在顯微鏡下觀察尿酸鹽晶體（MSU）的形態(tài)。
　　2.取培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的成骨前體細(xì)胞3T3-E1，設(shè)置對(duì)照組（不加入MSU），實(shí)驗(yàn)組分別加入0.02、0.06、0.10、0.30、0.50mg/ml的MSU刺激培養(yǎng)48h后，用MTT法觀察尿酸鹽晶體MSU對(duì)成骨前體細(xì)

2、胞增殖情況的影響。
　　3.取對(duì)數(shù)期的成骨前體細(xì)胞3T3-E1，分別加入成骨誘導(dǎo)劑，設(shè)置對(duì)照組（不加入MSU），實(shí)驗(yàn)組分別加入0.02、0.10、0.30mg/ml的尿酸鹽晶體（MSU），誘導(dǎo)7天后，行堿性磷酸酶染色、茜素紅染色觀察尿酸鹽晶體（MSU）對(duì)成骨前體細(xì)胞（3T3-E1）分化為成骨細(xì)胞的情況，并測(cè)定吸光度值。
　　4.取對(duì)數(shù)期的成骨前體細(xì)胞3T3-E1，分別加入成骨誘導(dǎo)劑，設(shè)置對(duì)照組（不加入MSU），實(shí)驗(yàn)組分別加入

3、0.02、0.10mg/ml的尿酸鹽晶體（MSU），分別誘導(dǎo)3天、7天、14天提取RNA樣品，行RT-PCR測(cè)定基因Runx2、 Osterix、 Osteocalcin、Collal I的表達(dá)。
　　5.取對(duì)數(shù)期的成骨前體細(xì)胞3T3-E1，加入成骨誘導(dǎo)劑，設(shè)置對(duì)照組（不加入MSU），實(shí)驗(yàn)組分別加入0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/ml的尿酸鹽晶體（MSU），分別誘導(dǎo)7天，提取RNA、蛋白，觀察尿酸鹽晶體（MS

4、U）刺激成骨前體細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞過程中的分泌情況及其內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.顯微鏡下，尿酸鹽晶體（MSU）有兩種形態(tài)：一種呈柱狀；一種呈針狀，該形狀與臨床病理中觀察的尿酸鹽晶體形態(tài)極其相似。
　　2.不同濃度的尿酸鹽晶體(MSU)均能抑制成骨前體細(xì)胞的增殖，且隨著尿酸鹽濃度的增加抑制作用愈明顯，且不同濃度間的抑制作用均具有明顯的差異（P＜0.01）。
　　3.堿性磷酸酶、茜素紅染色顯示：不同濃度

5、的尿酸鹽晶體（MSU）均能抑制成骨前體細(xì)胞（3T3-E1）向成骨細(xì)胞的分化。
　　4.在成骨誘導(dǎo)下分別培養(yǎng)3天、7天、14天，不同濃度的尿酸鹽晶體（MSU）均抑制Runx2、 Osterix、 Osteocalcin、Collal I的表達(dá)，且隨著尿酸鹽（MSU）濃度的增加作用愈加明顯。
　　5.在成骨誘導(dǎo)的第7天，在mRNA水平，尿酸鹽晶體（MSU）能夠促進(jìn)Bip、CHOP、ATF4其表達(dá)；在蛋白水平，隨著尿酸鹽晶體（MS

6、U）濃度的增加，也能促進(jìn)Bip、CHOP、ATF4、eIF2α蛋白的表達(dá)。即尿酸鹽晶體（MSU）抑制成骨前體細(xì)胞的增殖、分化、及分泌功能可能是由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的。
　　結(jié)論：
　　1.配置尿酸鹽晶體（MSU），形態(tài)與痛風(fēng)石臨床病理圖片極其相似。
　　2.尿酸鹽晶體（MSU）可抑制成骨前體細(xì)胞（3T3-E1）的增殖。
　　3.尿酸鹽晶體（MSU）可抑制成骨前體細(xì)胞（3T3-E1）向成骨細(xì)胞的分化。
　　4.尿