內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激對GABAB受體膜表達的影響.pdf

1、γ-氨基丁酸（GABA）B型受體為代謝型受體，屬于G蛋白偶聯(lián)受體（G-protein coupled receptor，GPCR)家族。GABAB受體廣泛分布于哺乳動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，介導緩慢的、長時程的突觸傳遞抑制效應以調(diào)節(jié)神經(jīng)元的興奮性。興奮型受體與抑制型受體之間存在精細的平衡調(diào)控機制以維持神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能，一旦這種平衡被打破將會引發(fā)一系列神經(jīng)系統(tǒng)疾病。持續(xù)性谷氨酸受體的激活以及過度興奮引發(fā)的癲癇、神經(jīng)性疼痛疾病等均可下調(diào)GAB

2、AB受體的膜表達水平。
　　內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是真核細胞中重要的細胞器，負責新生蛋白質(zhì)的合成、折疊以及轉(zhuǎn)運等，此外還是脂類合成、鈣離子儲存的重要場所。包括缺氧、高糖、病毒感染等在內(nèi)的多種生理病理刺激都會導致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的未折疊以及錯誤折疊的蛋白的積累，引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激，進而誘導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應。研究證實，過度興奮誘導的癲癇、神經(jīng)性疼痛等疾病的發(fā)生發(fā)展都與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關，抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激可有效保護神經(jīng)細胞，降低興奮性損傷。因而可推測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激可能參與調(diào)控

3、GABAB受體的膜表達。
　　本文以高表達GABAB受體的HEK293細胞為研究對象，探究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激對GABAB受體膜表達的調(diào)控。首先利用 ELISA實驗技術檢測了毒胡蘿卜素（Thapsigargin, TG）和衣霉素（Tunicamycin, TM）誘導的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激對GABAB受體膜表達的影響。結(jié)果顯示，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激能顯著降低GABAB受體的膜表達水平，并且這種下調(diào)效應具有亞型特異性（僅對GABABR1a亞型有影響而對GABABR

4、1b亞型無影響）。由于GABAB受體為異源二聚體，為探究兩個亞基分別在其中所起的作用，在HEK293細胞中單獨轉(zhuǎn)染GABABR1a-ASA或GABABR2，ELISA結(jié)果顯示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激對GABAB受體膜表達的影響僅依賴于GABABR1亞基。利用免疫熒光雙酶標標記膜上受體觀察不同處理時間受體的內(nèi)化程度，結(jié)果顯示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激是通過調(diào)控受體的內(nèi)化過程影響其膜表達的。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應下游靶蛋白CHOP被報導與GABAB受體存在直接的相互作用。利用s

5、iRNA技術下調(diào)CHOP的表達，可顯著抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激促GABAB受體內(nèi)化的效應，同時降低了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激對該受體膜表達水平的影響。因此，我們推測CHOP參與了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激調(diào)控GABAB受體內(nèi)化的過程。
　　綜上所述，本研究證實內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激顯著下調(diào)GABAB受體膜表達水平，且該效應具有亞型特異性。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激可能通過CHOP調(diào)控GABAB受體的內(nèi)化過程，進而影響該受體的膜表達。研究結(jié)果有助于闡明病理條件下GABAB受體膜表達下調(diào)的機制，同時有