2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  1、研究誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum, ER)應(yīng)激對(duì)乳腺癌MDA-MB-231肝素酶(Heparanase,HPSE)表達(dá)和細(xì)胞凋亡的影響。
  2、探討硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)對(duì)處于 ER應(yīng)激乳腺癌 MDA-MB-231細(xì)胞葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein, GRP78)、HPSE表達(dá)及凋亡的影響。
  3、研究S

2、iRNA敲減GRP78對(duì)HS治療乳腺癌細(xì)胞凋亡敏感性的影響。
  方法:
  1、提取MCF-7細(xì)胞匯合期培養(yǎng)液中的HS鏈;以濃度300、600、900、1200μg/mL的HS處理乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞24、36、72h后采用MTT比色法,檢測(cè)增殖抑制率。
  2、以乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231為研究對(duì)象,用不同處理因素(無(wú)血清、低糖、低氧、化療藥物)不同時(shí)間(0、3、6、12、24 h)處理細(xì)胞,West

3、ern blotting檢測(cè)GRP78和HPSE的表達(dá);同上處理,溴化丙啶(propidium iodide, PI)染色流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。
  3、分別用HS、衣霉素(Tunicamycin, TM)和HS+TM不同時(shí)間(0、6、12、24、36和48h)處理細(xì)胞,Western blotting檢測(cè)GRP78和HPSE的表達(dá);同上處理細(xì)胞,通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。
  4、分別用HS、TM和HS+

4、TM處理細(xì)胞48h,用RT-PCR法檢測(cè)GRP78mRNA和HPSEmRNA的表達(dá)。
  5、SiRNA轉(zhuǎn)染敲減GRP78的表達(dá),檢測(cè)HS誘導(dǎo)凋亡率的改變。
  結(jié)果:
  一、HS對(duì)乳腺癌MDA-MA-231細(xì)胞的增殖抑制作用。
  MTT法顯示結(jié)果為不同濃度的HS均能抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖,與對(duì)照組比較有顯著差異(P﹤0.05),且隨著HS濃度的增加抑制率隨之增大,隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)抑制率也隨之增加;大劑量組H

5、S1200μg/ml時(shí)對(duì)細(xì)胞的抑制作用最強(qiáng),作用72h后,最大抑制率為65.59%。
  二、誘導(dǎo)ER應(yīng)激對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞HPSE表達(dá)和細(xì)胞凋亡的影響
  1、無(wú)血清、低糖、低氧、順鉑均可誘導(dǎo)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激上調(diào)GRP78和HPSE的表達(dá)(P<0.01);同時(shí)PI染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,顯示四種處理因素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡均不敏感。
  2、給予經(jīng)典的ER stress誘導(dǎo)劑TM同

6、樣可以上調(diào)GRP78和HPSE蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá),與對(duì)照組相比有顯著差異(P<0.01)。PI染色后流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析, MDA-MB-231細(xì)胞凋亡率在48h時(shí)達(dá)最高為22.62%,與對(duì)照組0h相比,36h、48h差異具有顯著性(P<0.01)。
  三、HS對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞GRP78、HPSE表達(dá)及凋亡的影響
  1、HS可以下調(diào)GRP78和HPSE蛋白表達(dá),尤其在36和48h時(shí)下調(diào)的最為顯著(P<0

7、.01)。PI染色后流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析, MDA-MB-231細(xì)胞凋亡率在48h時(shí)達(dá)最高約30%,與對(duì)照組0h相比,36h、48h差異具有顯著性(P<0.01)。
  2、HS可降低TM誘導(dǎo)的GRP78和HPSE蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá),不同作用時(shí)間組GRP78和HPSE表達(dá)與對(duì)照組比較無(wú)顯著差異(P<0.01)。
  3、HS增加TM誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡率,與對(duì)照組比較,有顯著差異(P<0.01)。
  4、HS能將GRP78

8、 SiRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞的凋亡率提升到70%以上,與對(duì)照組比較,有顯著差異(P<0.01)。
  結(jié)論:
  1、HS對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖具有抑制作用,且這一作用呈現(xiàn)出濃度和時(shí)間依賴(lài)性。
  2、當(dāng)腫瘤細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時(shí),HPSE的表達(dá)像GRP78一樣發(fā)生上調(diào)。HPSE表達(dá)的上調(diào)提示HPSE可能參與了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時(shí)腫瘤細(xì)胞適應(yīng)性保護(hù)機(jī)制的構(gòu)建,它可能構(gòu)成腫瘤細(xì)胞對(duì)凋亡的耐受的原因之一。
  3、HS對(duì)

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