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1、目的:檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑兩個不同階段的標(biāo)志物GRP78、GADD153 在視網(wǎng)膜脫離后不同時期的表達與定位,探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑是否參與了視網(wǎng)膜脫離后的細胞凋亡過程。 方法:通過向Wistar 大鼠左眼視網(wǎng)膜下注射10mg/ml 透明質(zhì)酸鈉制造視網(wǎng)膜脫離模型,在脫離后不同時間點摘除眼球制作石蠟病理切片,光鏡下行組織學(xué)檢查;運用先進的熒光TUNEL 聯(lián)合激光共聚焦顯微鏡檢測視網(wǎng)膜的細胞凋亡情況;用半定量RT-PCR 檢測G
2、RP78、GADD153 mRNA 的表達;用Western blot 檢測GRP78、GADD153 蛋白水平的表達;運用免疫熒光聯(lián)合激光共聚焦顯微鏡檢測GRP78、GADD153 在視網(wǎng)膜的表達與分布。 結(jié)果:組織學(xué)檢查顯示視網(wǎng)膜脫離后,發(fā)生了一系列組織病理改變:光感受器外節(jié)的縮短與缺失,光感受器細胞、雙極細胞、神經(jīng)節(jié)細胞、神經(jīng)纖維層的變性,Müller 細胞纖維的斷裂等,其中光感受器細胞數(shù)目的減少是最顯著的改變。視網(wǎng)膜脫
3、離后8d 內(nèi)出現(xiàn)細胞凋亡現(xiàn)象,高峰在2-4d,主要集中在光感受器細胞層。GRP78 mRNA、GADD153 mRNA 在視網(wǎng)膜脫離后1/2d、1d、2d、4d 表達顯著升高;GRP78 蛋白在視網(wǎng)膜全層均可見表達,脫離后1/2d、1d、2d、4d、8d、16d、32d 表達顯著升高,其中8d、16d、32d 表達最高;GADD153蛋白主要在光感受器細胞層可見表達,在脫離后1/2d、1d、2d、4d表達顯著升高。GADD153 的表達
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