內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對胃癌細胞侵襲遷移能力的影響.pdf

1、研究背景和目的:
　　多種應(yīng)激因素如營養(yǎng)剝奪、缺血缺氧、鈣代謝障礙及蛋白質(zhì)糖基化受阻等均可導(dǎo)致蛋白質(zhì)折疊障礙，未折疊蛋白質(zhì)堆積于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)，細胞的這種生存狀態(tài)稱為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress,ERS）。由此誘發(fā)細胞發(fā)生一系列自我保護性反應(yīng)，稱為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)或未折疊蛋白反應(yīng)（ unfolded protein response,UPR)。近年來，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)ERS在腫瘤組織中普遍存在。它作為細胞

2、的一種自我保護性反應(yīng)，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，并參與調(diào)控腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移。但目前 ERS與胃癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系，尚報道甚少。本課題擬以胃癌細胞系 SGC7901和 BGC823作為研究對象，使用 ERS經(jīng)典誘導(dǎo)劑衣霉素（tunicamycin,TM)處理胃癌細胞，誘導(dǎo)其產(chǎn)生ERS，探討ERS對胃癌細胞侵襲及遷移能力的影響。
　　方法：
　　1.ERS細胞模型的建立 ERS誘導(dǎo)劑衣霉素（5μg/ml）分別處理胃癌細胞系SGC7901

3、和BGC823后，于處理后0h、12h、24h及36h提取總蛋白，采用Western blot技術(shù)檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標志蛋白GRP78的表達。
　　2.細胞劃痕實驗和 Transwell實驗衣霉素（5μg/ml）分別處理 SGC7901和 BGC8230h、12h、24h及36h后，使用細胞劃痕實驗分別觀察兩種胃癌細胞在各時間點的劃痕愈合度，使用 Transwell法分別檢測兩種胃癌細胞在各時間點遷移或侵襲到下室的細胞數(shù)。
　　

4、3.檢測 ERS對侵襲遷移相關(guān)蛋白表達的影響以胃癌細胞系 SGC7901和BGC823為處理對象，衣霉素處理12h、24h、36h后，Western blot檢測侵襲遷移相關(guān)蛋白MMP-9和VEGF蛋白的變化。
　　4.統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(X±S)表示，應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)， P＜0.05為差異有顯著性。
　　結(jié)果：
　　1.衣霉素可誘導(dǎo)胃癌細胞系SGC7901和BGC823發(fā)生ERS與0

5、h相比，衣霉素處理胃癌細胞系SGC7901和BGC823，12h、24h及36h后，GRP78在蛋白水平的表達量均明顯提高，具有時間依賴性（P<0.05)。
　　2.ERS對胃癌細胞系SGC7901和BGC823侵襲遷移能力的影響與對照組相比，衣霉素處理胃癌細胞系SGC7901和BGC82312h、24h及36h后，胃癌細胞的侵襲遷移能力均有明顯的增加,且具有時間依賴性（P<0.05)。
　　3.ERS對侵襲遷移相關(guān)蛋白表達