Mcl-1對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的胃腺癌細胞凋亡敏感性的影響.pdf

1、背景及目的：目前晚期胃腺癌的治療仍未令人滿意。一般認為這種情況在很大程度上是由于胃腺癌細胞對臨床治療藥物誘導(dǎo)凋亡的抵抗。近期的研究結(jié)果已經(jīng)表明：除了線粒體外，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也在調(diào)節(jié)化療藥物誘發(fā)的細胞凋亡中起著重要的作用。這些化療藥物能夠引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和后續(xù)未折疊蛋白反應(yīng)的激活。盡管未折疊蛋白反應(yīng)可通過減緩內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)而保護細胞，過強或持續(xù)時間過長的應(yīng)激反應(yīng)可引起以凋亡為主的細胞死亡。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的胃腺癌細胞凋亡的調(diào)控機制尚未確定，但已經(jīng)清楚

2、很多在其它凋亡途徑中有重要作用的分子也參與調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細胞凋亡。其中，Bcl-2家族蛋白尤為重要，因為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細胞凋亡可以被過表達的Bcl-2或其同源性抗凋亡分子所抑制。據(jù)此，本課題組旨在研究Bcl-2家族成員，特別是抗凋亡分子Mcl-1在調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的胃腺癌細胞凋亡中的作用，以期尋找克服胃腺癌對化療誘導(dǎo)凋亡不敏感的潛在靶點。
　　 方法：采用誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的天然核苷抗生素衣霉素在不同時間段處理胃腺癌細胞株

3、SGC-7901和BGC-823。通過PI染色法流式細胞術(shù)檢測凋亡率。Western blot 檢測caspase-8，-9，-3的活化。Western blot 檢測Bcl-2家族蛋白，包括Bcl-2，Bcl-XL和Mcl-1的表達。JC-1染色、流式細胞儀檢測線粒體膜電位（Δψm）的變化。qRT-PCR檢測Mcl-1 mRNA表達。pcDNA3.0/Mcl-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及siRNA技術(shù)“沉默” Mcl-1基因的表達，Western b

4、lot分別檢測Mcl-1轉(zhuǎn)染效率。
　　 結(jié)果：雖然PI染色檢測結(jié)果，caspase-8，-9，-3的活化以及膜電位的降低都表明衣霉素誘導(dǎo)BGC-823有一定程度的凋亡，而SGC-7901似乎對衣霉素誘導(dǎo)的凋亡稍不敏感。這可能與衣霉素刺激后的Mcl-1分子表達的顯著上升有關(guān)，Mcl-1分子的siRNA敲除實驗促凋亡及Mcl-1過表達的抗凋亡結(jié)果都表明Mcl-1在保護細胞抗衣霉素誘導(dǎo)的細胞凋亡中起著重要的作用。相反，衣霉素的處理不

5、會引發(fā)Bcl-2和 Bcl-XL表達的顯著改變。衣霉素作用SGC-7901細胞Mcl-1分子的上調(diào)和Mcl-1在mRNA水平的升高有關(guān)，表明其中還可能涉及到它的轉(zhuǎn)錄機制。
　　 結(jié)論：體外培養(yǎng)的人胃腺癌細胞對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細胞凋亡敏感性的變化和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀況下Mcl-1的表達水平相關(guān)。胃腺癌細胞在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激下Mcl-1表達水平的升高能夠阻礙其誘導(dǎo)的細胞凋亡。因此，在胃腺癌的藥物治療能引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的情況下，Mcl-1的靶點治療