阻斷胃泌素-CCKB受體環(huán)對胃癌細胞遷移、侵襲的影響.pdf

1、 《中國圖書資料分類法》 單位代碼：10660 分類號：R73 學 號：10660S100110 貴陽醫(yī)學院 2013 屆碩士學位論文 阻斷胃泌素/CCKB 受體環(huán)對胃癌細胞 遷移、侵襲的影響 （保密時間：2013 年 6 月-2016 年 6 月） 研 究 生： 曾 怡 導 師： 周建獎 教授 年

2、級： 2010 級 專 業(yè)： 生物化學與分子生物學 2013 年 5 月 15 日 貴陽醫(yī)學院 2013 屆碩士研究生論文 - 3 - 阻斷 阻斷胃泌素 胃泌素/CCKB 受體環(huán)對胃癌細胞遷移、侵襲的影響 受體環(huán)對胃癌細胞遷移、侵襲的影響 生物化學與分子生物學研究生：曾怡 導師：周建獎 教授 摘 要 [目的] 通過人膽囊收縮素 B(CCKB)受體阻斷劑丙谷胺(proglumide，PGL)阻斷高表達胃泌素(Gast

3、rin)胃癌細胞上 CCKB 受體， 同時用 RNA 干擾技術建立沉默胃泌素基因的穩(wěn)轉胃癌細胞株，構建阻斷胃泌素/CCKB 受體環(huán)的細胞模型，研究阻斷此環(huán)對胃癌細胞體外遷移、侵襲的影響及其分子機制。 [方法] 設計靶向胃泌素的 siRNA，構建靶向胃泌素基因 siRNA 的真核表達載體Psilencer3.1/Gas－siRNA；轉染胃癌細胞 AGS，用 G418 篩選陽性細胞克隆，建立穩(wěn)定轉染細胞株 AGS /Gas－siRNA；用丙

4、谷胺處理穩(wěn)定高表達胃泌素的胃癌細胞AGS/Gastrin、SGC-7901/Gastrin，通過 MTT 法、軟瓊脂克隆形成實驗檢測細胞增殖；細胞劃線實驗、Transwell 小室實驗檢測細胞遷移、侵襲； Real-time PCR、Western blot 檢測細胞中胃泌素 MMP-2、VEGF 基因和蛋白表達；ELISA 檢測細胞培養(yǎng)液中 MMP-2、VEGF 濃度。 [結果] 成功構建靶向胃泌素基因 siRNA 的真核表達載體 P

5、silencer3.1/Gas－siRNA，建立穩(wěn)定沉默胃泌素基因的胃癌細胞株 AGS /Gas－siRNA。用丙谷胺處理高表達胃泌素胃癌細胞和 siRNA 干擾沉默胃泌素基因后，細胞相對遷移距離、遷移細胞數(shù)及穿越基質膠的侵襲細胞數(shù)均顯著降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 細 胞 增 殖 實 驗 中 ， 高 表 達 胃 泌 素 胃 癌 細 胞 的 相 對 增 殖 率 分 別 為205.22%(SGC-7901)和207.

6、43%(AGS)， 細胞克隆形成相當率為 249.78%(SGC-7901)和 224.79%(AGS)，均高于空載體穩(wěn)轉的細胞(100%)，經(jīng)丙谷胺處理后，相對增殖率下降 107.46%(SGC-7901)和 110.53%(AGS)， 克隆形成相當率下降 170.04% (SGC 7901)和 137.19%(AGS)； 沉默胃泌素基因的穩(wěn)轉胃癌細胞與空載體穩(wěn)轉的細胞比，相對增殖率下降 58.60%， 克隆形成率下降 47.11%，