miR-34a對胃癌細(xì)胞遷移侵襲的調(diào)控機(jī)制及胃癌臨床預(yù)后相關(guān)因素的研究.pdf

1、本文分析了miR--34a對胃癌細(xì)胞遷移侵襲的調(diào)控機(jī)制及胃癌臨床預(yù)后相關(guān)因素。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：miR-34a對胃癌細(xì)胞遷移侵襲能力的調(diào)控及機(jī)制研究。
　　目的：侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要特征之一，直接影響晚期腫瘤患者的臨床治療效果及患者預(yù)后生存情況。越來越多的證據(jù)表明microRNA(miRNA)與胃癌的遷移侵襲密切相關(guān)。Fra-1是轉(zhuǎn)錄因子AP-1(Activator Protein1)的一個調(diào)節(jié)亞基。

2、AP-1通過與靶基因啟動子上的TPA反應(yīng)元件結(jié)合，調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄，從而參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。Fra-1是ras激活的AP-1復(fù)合物中的主要成分。多種惡性腫瘤如、結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌等中高表達(dá)，并且與這些腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移等一系列病理過程有關(guān)。在本實驗室中我們檢測遷移侵襲性不同的胃癌細(xì)胞株SGC-7901、BCG-823中miR-34a的表達(dá)情況，研究miR-34a對胃癌細(xì)胞遷移、侵襲及增殖方面的影響，并初步探討其分子調(diào)控機(jī)

3、制。
　　方法：運(yùn)用實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaetion，RT-PCR)法分析miR-34a在遷移侵襲性不同的胃癌細(xì)胞株SGC-7901，BCG-823中的表達(dá)情況。劃痕遷移實驗、Transwell侵襲實驗和CCK8實驗分別檢測miR-34a對SGC-7901，BCG-823細(xì)胞的遷移、侵襲和增殖能力的影響。采用生物信息學(xué)預(yù)測及熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞CmiR-34a對靶基因Fo

4、s蛋白相關(guān)抗原-1(FosRelated Atigen-1，F(xiàn)ra-1)的靶向調(diào)控作用。Western blotting檢測Fra-1，金屬基質(zhì)蛋白酶-9(matrix metalloproteinases9，MMP9)，CyclinD1蛋白的水平。
　　結(jié)果：miR-34a在遷移侵襲性強(qiáng)的胃癌細(xì)胞株SGC-7901中的表達(dá)水平明顯低于遷移侵襲能力較弱的BCG-823。轉(zhuǎn)染miR-34a后，兩種胃癌細(xì)胞SGC-7901，BCG-8

5、23穿過Trasnwell小室的細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞遷移力明顯小于轉(zhuǎn)染陰性對照組，說明miR-34a可抑制胃癌細(xì)胞遷移及侵襲能力。CCK8實驗結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-34a后兩種胃癌細(xì)胞株的吸光值都明顯低于轉(zhuǎn)染陰性對照組，提示其增殖能力受到抑制。熒光素酶報告基因及Western blotting實驗結(jié)果表明，miR-34a能夠直接靶向調(diào)節(jié)Fra-1，降低胃癌中Fra-1的表達(dá)。轉(zhuǎn)染的miR-34a還可使胃癌細(xì)胞株SGC-7901、BCG-823中遷

6、移侵襲及周期相關(guān)蛋白MMP9，Cyclin D1表達(dá)量下降。
　　結(jié)論：高表達(dá)的miR-34a可通過靶向調(diào)控Fra-1的表達(dá)，并影響下游侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白分子MMP9、Cyclin D1的表達(dá)從而抑制胃癌細(xì)胞遷移、侵襲及增殖能力。
　　第二部分：Ⅱ/Ⅲ期胃癌患者術(shù)前淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞比(LMR)與預(yù)后的關(guān)系。
　　目的：隨著全球生活方式的改變和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，胃癌的發(fā)病率逐年增高，而生存率沒有較大變化，胃癌患者預(yù)后仍然較差。近

7、來，淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞比(lymphocyte to monocyte ratio，LMR)已被報道與某些癌癥的臨床預(yù)后相關(guān)，但在胃癌中缺少相關(guān)的研究。本文探討Ⅱ/Ⅲ期胃癌患者術(shù)前外周血LMR對患者術(shù)后預(yù)后的評估意義。
　　方法：選取2008年2月至2008年12月在南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院行根治性切除術(shù)的胃癌患者426例，檢測外周血淋巴細(xì)胞計數(shù)、單核細(xì)胞計數(shù)，通過淋巴細(xì)胞計數(shù)與單細(xì)胞計數(shù)的比值獲得LMR。根據(jù)受試者工作特征(RO

8、C)曲線，獲得LMR最佳截斷值。采用卡方檢驗評估LMR與各臨床特征之間的關(guān)系。采用Kaplan-Meier法計算生存率并用log-rank法進(jìn)行單因素分析。采用COX比例風(fēng)險模型進(jìn)行多因素分析。
　　結(jié)果：腫瘤負(fù)荷較小者LMR較高(P＜0.001)。預(yù)后相關(guān)臨床病例因素的單因素分析結(jié)果提示:在總生存期(overall survival，OS)方面，較低的LMR，升高的單核細(xì)胞(P=0.01)，較大的腫瘤負(fù)荷(P＜0.001)，血管

9、/神經(jīng)浸潤(P＜0.001)，切緣陽性(P=0.042)，TNM分期為Ⅲ期(P＜0.001)及未進(jìn)行輔助化療(P=0.045)是影響患者總生存期的不良預(yù)后因素。同樣在無復(fù)發(fā)生存期（recurrence-free survival，RFS）中，低LMR(P=0.001)，高單核細(xì)胞數(shù)(P=0.016)，較大腫瘤負(fù)荷(P=0.007)，血管神經(jīng)/浸潤(P＜0.001)，切緣陽性(P=0.002），TNM分期為Ⅲ期(P＜0.001)患者，是影

10、響預(yù)后的高風(fēng)險因素。
　　結(jié)論：多因素COX風(fēng)險比例函數(shù)模型分析結(jié)果顯示高LMR與無病生存期存在臨界相關(guān)(HR=0.775;95％CI:0.592-1.01; P=0.06)。而在總生存期(OS)方面，LMR(HR=0.688;95％CI:0.521-0.908; P=0.008)可作為影響預(yù)后的獨立性因素。亞組分析顯示，升高的LMR除在Ⅲ期患者RFS中產(chǎn)生臨界意義(P=0.052)，在TNM分期為Ⅱ期或Ⅲ期以及無論是否進(jìn)行輔助化