miR-301a在胃癌中的表達(dá)及意義和誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞克隆形成、侵襲和遷移的機(jī)制.pdf

1、論文題目：m i R 一3 0 1 a 在胃癌中的表達(dá)及其意義和誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞克隆形成、侵襲和遷移機(jī)制答辯委員會(huì)主席： 鄭樹森答辯委員會(huì)成員： 鄭樹森 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院張啟瑜 溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院黃東勝 浙江省人民醫(yī)院張勤 浙江省人民醫(yī)院王躍東 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院論文答辯日期：2 0 1 3 年5 月2 1 日溫州醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文 m i R - 3 0 l a 在胃癌中的表達(dá)及意義和誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞克隆形成、 侵襲和遷

2、移的初．制 中文摘要 研究背景：在全球，胃癌的死亡率僅次于肺癌居第二位，在我國也是死亡率 最高的惡性腫瘤之一，其5 年生存率低于4 0 ％，早期診斷和治療是提高生存率的 重要手段，因此尋找理想的早期診斷標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)，對(duì)改善患者生存率有重 要意義。M i c r o R N A 是一類內(nèi)源性非編碼的功能性R N A s ，大約2 卜2 5 個(gè)核苷酸，它 通過調(diào)節(jié)m R N A 的翻譯或降解而起到致癌或抗癌作用。其在腫瘤中的異常表達(dá)體

3、現(xiàn)了其與人類腫瘤的形成、發(fā)生、發(fā)展的密切相關(guān)，針對(duì)m i R N A 與腫瘤的研究充 分體現(xiàn)了m i R N A 參與基因調(diào)控的復(fù)雜性，它們調(diào)控的靶基因關(guān)系著腫瘤細(xì)胞的分 化、增殖、克隆、侵襲等，因此以m i R N A 為切入點(diǎn)，研究胃癌形成、發(fā)展、浸潤 和轉(zhuǎn)移過程中的作用及機(jī)制，為胃癌早期診斷、預(yù)后評(píng)估和靶向藥物治療等開辟 了新的途徑。 目的：檢測(cè)m i R - 3 0 l a 在人胃癌細(xì)胞系( A G S 、M K N 一2 8

4、、B G C 一8 2 3 、H C G 一2 7 、 S G C 一7 9 0 1 和M K N 一4 5 ) 、人正常胃上皮細(xì)胞G E S - I 表達(dá)，在人胃癌組織的表達(dá)及其 臨床病理意義；探討m i R - 3 0 l a 對(duì)人胃癌細(xì)胞S G C 一7 9 0 1 、H C G 一2 7 細(xì)胞克隆、侵 襲和遷移的影響以及對(duì)靶基因N F - k B 蛋白表達(dá)的調(diào)控。 方法：提取人胃癌細(xì)胞系( A G S 、M K N 一2 8 、

5、B G C 一8 2 3 、H C G 一2 7 、S G C 一7 9 0 1 和M K N 一4 5 ) 、 人正常胃上皮細(xì)胞G E S - I 及2 9 例人胃癌組織及其配對(duì)的癌旁非腫瘤胃粘膜組織 的m i I i N A s ，按m i S c r i p t R e v e r s e T r a n s c r i p t i o n K i t 合成c D N A ，m i R - 3 0 l a 、靶 基因N F —k

6、B 和U 6 引物購自Q I A G E N 公司，用A B I 7 5 0 0 F A S T 型熒光定量P C R 儀 進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量P C R 。將5 ．0 ×1 0 5 個(gè)細(xì)胞／孔接種于6 孔培養(yǎng)板中，3 7 ℃、混 勻，5 ％C 0 2 孵育箱靜置培養(yǎng)2 4 小時(shí)。按L i p o f e c t a m i n e 2 0 0 0 說明書將N e g a t i v e C o n t r o l B 和m i

7、R - 3 0 l a 抑制物各2 u l ( 5 0 p m o l ／1 1 1 ) 轉(zhuǎn)入S G C 一7 9 0 1 和H C G 一2 7 細(xì) 胞，轉(zhuǎn)染2 4 小時(shí)后熒光顯微鏡檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率、R T —P c R 檢測(cè)m i R - 3 0 t a 和靶基因 N 卜k B 的表達(dá)水平，并觀察細(xì)胞克隆、侵襲和遷移能力。轉(zhuǎn)染7 2 小時(shí)后W e s t e r n B l o t 法檢測(cè)靶基醫(yī)N 卜k B 的表達(dá)水平。應(yīng)用原位雜交技術(shù)