凋亡抑制蛋白Livin在人胃癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：本研究旨在：(1)通過檢測Livin基因在胃癌細(xì)胞系和胃癌組織、癌旁組織和良性胃病胃粘膜組織中的表達(dá)，探討Livin在部分胃癌細(xì)胞系和胃癌組織中表達(dá)是否上調(diào)；(2)通過分析胃癌組織中Livin表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，探討Livin檢測輔助判斷胃癌惡性程度和進(jìn)展情況的可能性；(3)通過檢測胃癌中IAP家族另一成員Survivin基因的表達(dá)，探討兩者表達(dá)的相關(guān)性；(4)設(shè)計靶向于Livin的siRNA轉(zhuǎn)染至人胃癌細(xì)胞系，檢測轉(zhuǎn)染

2、后對該細(xì)胞LivinmRNA的抑制情況，從而篩選有效沉默Livin表達(dá)的siRNA，并探討siRNA沉默胃癌細(xì)胞Livin表達(dá)的可行性；(5)SiRNA沉默人胃癌細(xì)胞株Livin基因表達(dá)后，通過檢測細(xì)胞增殖能力及對凋亡刺激劑敏感性，探討Livin在細(xì)胞增殖和凋亡抵抗中可能發(fā)揮的作用。 方法：(1)采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測三株胃癌細(xì)胞、胃癌組織、癌旁組織和良性胃病胃粘膜組織中Livin和Survivin的mR

3、NA的表達(dá)；(2)用Westernblot法檢測上述細(xì)胞系及組織中Livin和Survivin蛋白的表達(dá)；(3)設(shè)計靶向于Livin的siRNA轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞SGC-790148h后，RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染前后LivinmRNA的改變；(4)流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染siRNA前后胃癌細(xì)胞SGC-7901對凋亡刺激劑敏感性的改變，MTT法檢測5-FU、順鉑對轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)的改變及轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞增殖能力的差異。 結(jié)論：(

4、1)Livin及Survivin在三株胃癌細(xì)胞株和部分胃癌患者中表達(dá)，而在另一部分胃癌組織、良性胃病胃粘膜組織、癌旁組織中未見表達(dá)，提示其表達(dá)與部分胃癌的發(fā)生發(fā)展可能有關(guān)，Livin在胃癌中表達(dá)上調(diào)的機(jī)制，尚需進(jìn)一步研究；(2)本研究中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Livin陽性率高于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組，組織分化程度較差組Livin陽性率高于分化程度較高組，提示Livin可能與胃癌惡性程度及病情進(jìn)展可能有關(guān)；(3)Livin與Survivin表達(dá)在本研究中未

5、顯示相關(guān)性，提示兩者雖然系同一家族，但表達(dá)調(diào)控的機(jī)制并非完全一致，需進(jìn)一步探討；(4)體外轉(zhuǎn)染靶向于Livin的siRNA能夠沉默胃癌SGC-7901細(xì)胞Livin的表達(dá)，增加SGC-7901細(xì)胞對凋亡刺激劑(本研究選用化療藥物)的敏感性，抑制細(xì)胞的增殖，其作用的機(jī)制及在體內(nèi)情況尚需進(jìn)一步研究。本研究的初步結(jié)果提示Livin在胃癌細(xì)胞系及組織中較癌旁、良性胃病胃粘膜組織中表達(dá)明顯增高，Livin與胃癌的發(fā)生發(fā)展可能有關(guān)，且與胃癌細(xì)胞凋亡