

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、研究背景及目的:
糖尿病(diabetes,DM)發(fā)病率隨著當代生活方式的改變逐年增加,糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是DM最嚴重的慢性微血管并發(fā)癥之一,其患病率也隨之升高。在終末期腎衰竭(end-stage renal disease,ESRD)患者中由DN所占的比例也逐年增加。足細胞是不可再生的高度分化細胞,研究證明足細胞的損傷和凋亡在DN的發(fā)病和進展機制中占有重要地位。細胞在高糖環(huán)境下發(fā)生形
2、態(tài)和結(jié)構(gòu)改變?nèi)绶蚀?、足突分離、足細胞表面蛋白丟失、嚴重可致足細胞發(fā)生凋亡。其中凋亡與DN的發(fā)病機制密切相關(guān)。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是多功能細胞器,除參與機體物質(zhì)合成代謝外,在維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)中也起著重要的調(diào)節(jié)作用。高糖、氧化應(yīng)激等作用于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)時,持續(xù)的有害因素會啟動內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡程序使細胞發(fā)生凋亡。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechi-3-gallate,EGCG)是綠茶中含有茶多酚,研究表明EGCG在腫瘤、腦血管病、冠心病等慢性疾病
3、發(fā)揮重要的預(yù)防作用。但EGCG是否對糖尿病腎病具有預(yù)防作用及是否具有保護足細胞的作用至今未見明確報道。在該實驗中通過高糖誘導(dǎo)足細胞,建立細胞凋亡模型,比較EGCG干預(yù)前后足細胞的增殖能力、足細胞表面蛋白Nephrin和WT-1的表達、足細胞的凋亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白分子葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulatingprotein,GRP78)、磷酸化蛋白激酶樣ER激酶(p-double-stranded RNA likeendopla
4、smic reticulum kinase p-PERK)半胱氨酸天冬氨酸酶12(cysteinyaspartate-specific proteinases,Caspase-12)的表達情況。目的在于探究EGCG能否減輕高糖致足細胞的凋亡及是否通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡途徑發(fā)揮對足細胞的保護作用。
研究方法:
細胞分組:①正常糖組(NG:5.6mmol/L葡萄糖)②甘露醇組(M:5.6mmol/L葡萄糖+24.4 m
5、mol/L甘露醇)③高糖組(HG:30mmol/L葡萄糖)④不同濃度的EGCG組(E1:1μmol/L+HG; E10:10μmol/L+HG; E20:20μmol/L+HG; E40:40μmol/L+HG; E60:60μmol/L+HG; E80:80μmol/L+HG;E100:100μmol/L+HG)分別培養(yǎng)24h,48h,72h用CCK8檢測細胞增殖情況,根據(jù)細胞增殖結(jié)果將其分為四組進行后續(xù)實驗①正常糖組(NG:5.6m
6、mol/L葡萄糖)②甘露醇組(M:5.6mmol/L+24.4 mmol/L甘露醇)⑧高糖組(HG:30mmol/L葡萄糖)④E20組(20μmol/L+HG)培養(yǎng)72h后Western-blotting檢測足細胞表面蛋白Nephrin和WT-1的表達,流式細胞技術(shù)以及Hoechst染色檢測細胞凋亡,Western-blotting檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡途徑中標志性蛋白分子GRP78、p-PERK、Caspase-12的表達。
7、 結(jié)果:
1.足細胞的增殖:高糖刺激足細胞24h,48h,72h后,足細胞的增殖能力隨著時間增加而降低,并且細胞在培養(yǎng)72h后更為明顯。EGCG組在高糖環(huán)境下能夠促進足細胞的增殖,并且EGCG的濃度為20μmol/L培養(yǎng)72h后對促進足細胞的增殖更明顯,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
2.足細胞的損傷:各組細胞培養(yǎng)72h后,足細胞表面蛋白分子Nephrin和WT-1在HG組的表達明顯的低于NG組和M組(P<0.
8、05);與HG組相比,E20組足細胞Nephrin和WT-1表達增加(P<0.05)。
3.足細胞的凋亡:流式細胞術(shù)顯示:HG組足細胞的凋亡率(22.48%)明顯高于NG組(0.55%)和M組(0.72%)(P<0.05),而E20組細胞的凋亡率(6.57%)明顯低于HG組(P<0.05); Hoechst染色顯示:NG組和M組足細胞核形態(tài)大小一致、核質(zhì)均勻,HG組足細胞的細胞核則呈現(xiàn)固縮變小或花瓣狀等典型的凋亡形態(tài)改變,E2
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- EGCG通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡途徑減輕順鉑腎毒性.pdf
- 脂聯(lián)素通過減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡抑制心肌細胞鈣化.pdf
- 高糖經(jīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)肝細胞凋亡及其分子機制.pdf
- 硫辛酸對高Hcy、高糖所致小鼠足細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激性凋亡的影響.pdf
- 大鼠視網(wǎng)膜再灌注損傷致細胞凋亡的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機制研究.pdf
- 炎癥狀態(tài)下高脂通過NPC1介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激致足細胞損傷機制研究.pdf
- AT1受體自身抗體促腎臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激致足細胞凋亡機制研究.pdf
- 氟通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)大鼠HAT-7細胞凋亡的研究機制.pdf
- 高糖環(huán)境增強布比卡因引起的細胞凋亡——通過線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)依賴途徑.pdf
- 槲皮素抑制巨噬細胞raw264.7內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑的機制研究
- NGF通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激促進大鼠脊髓損傷修復(fù)的機制研究.pdf
- 高糖通過環(huán)氧化酶2依賴性途徑誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激.pdf
- 脊髓進行性壓迫致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激細胞凋亡的機制研究.pdf
- 脊髓缺血再灌注損傷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的應(yīng)激與細胞凋亡.pdf
- 貝伐單抗通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機制誘導(dǎo)肺癌A549細胞凋亡.pdf
- 腺苷通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)食管癌EC109細胞凋亡.pdf
- 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在氟致神經(jīng)干細胞凋亡中的作用.pdf
- ALA-PDT通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)瘢痕疙瘩成纖維細胞凋亡的研究.pdf
- 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與晚期氧化蛋白產(chǎn)物誘導(dǎo)足細胞凋亡的機制研究.pdf
- 鎘經(jīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)雞肝細胞凋亡機制的研究.pdf
評論
0/150
提交評論