氟對(duì)成釉細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶分子表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　氟元素在自然界中廣泛存在，其防齲作用的廣泛應(yīng)用是20世紀(jì)人類公共衛(wèi)生十大貢獻(xiàn)之一。然而，在牙齒發(fā)育時(shí)期攝入過量的氟會(huì)導(dǎo)致氟牙癥，不僅影響牙齒的結(jié)構(gòu)和美觀，也會(huì)對(duì)患者的心理產(chǎn)生負(fù)面影響。關(guān)于氟牙癥的發(fā)病機(jī)制，學(xué)者們普遍認(rèn)同，過量氟通過影響成釉細(xì)胞基質(zhì)蛋白和蛋白酶的合成和分泌，使釉質(zhì)礦化過程中釉原蛋白降解延遲或障礙，并最終導(dǎo)致氟牙癥發(fā)生。然而，過量氟影響釉質(zhì)基質(zhì)蛋白降解的具體機(jī)制目前尚未闡明。本研究擬在建立大鼠氟牙癥模型的

2、基礎(chǔ)上，通過檢測(cè)成釉細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶分子及其相關(guān)信號(hào)通路的表達(dá)變化，探索內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機(jī)制在氟牙癥形成中的作用，為臨床氟牙癥的預(yù)防及治療提供理論依據(jù)。
　　材料和方法:
　　選擇4周齡Wistar大鼠30只，體重約150g，雌雄各半。隨機(jī)分為對(duì)照組、F離子濃度為75mg/L組、150mg/L組，每組10只。對(duì)照組大鼠常規(guī)飼料喂養(yǎng)，自由飲用蒸餾水;給氟組大鼠用常規(guī)飼料喂養(yǎng)，分別自由飲用氟離子濃度為75mg/L、150mg/L的蒸餾水

3、。8周后，用水合氯醛腹腔麻醉處死，剝離下頜切牙，分別進(jìn)行透射電鏡、免疫組化、HE染色、TUNEL原位雜交法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，觀察氟對(duì)成釉細(xì)胞形態(tài)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶相關(guān)分子的表達(dá)。采用MetaMorph顯微圖像分析軟件，對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。所得數(shù)據(jù)使用SPSS13.0軟件處理，進(jìn)行單因素方差分析(One-WayANOVA)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　透射電鏡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照組大鼠切牙成釉細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻，組

4、織結(jié)構(gòu)清晰;低氟組大鼠細(xì)胞核染色質(zhì)分布不均，核膜結(jié)構(gòu)不完整，核中央出現(xiàn)凋亡小體，細(xì)胞質(zhì)固縮;高氟組大鼠細(xì)胞核呈空泡狀改變，染色質(zhì)在包膜邊緣聚集，呈新月狀形態(tài)，出現(xiàn)凋亡細(xì)胞的典型表現(xiàn)。HE染色顯示對(duì)照組成釉細(xì)胞呈柱狀，排列整齊;低氟組成釉細(xì)胞高度變矮，釉質(zhì)厚度變薄;高氟組成釉細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞極性消失，個(gè)別細(xì)胞出現(xiàn)扭曲，細(xì)胞之間間隙不規(guī)則，釉質(zhì)顯著變薄。免疫組化結(jié)果顯示，GRP78、XBP-1、CHOP、Caspase-12、Calret

5、iculin的表達(dá)隨氟濃度的增加而增加，以上各組的表達(dá)強(qiáng)度均具有顯著性差異(P＜0.05)。TUNEL原位雜交檢測(cè)結(jié)果顯示，對(duì)照組成釉細(xì)胞TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞罕見，多數(shù)細(xì)胞核呈深藍(lán)色，低氟組和高氟組中TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞顯著多于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，兩實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較具有顯著差異。
　　結(jié)論:
　　1.一定濃度的氟可以誘導(dǎo)大鼠切牙成釉細(xì)胞發(fā)生鈣超載，導(dǎo)致ERS。
　　2.高濃度氟可誘發(fā)強(qiáng)烈ERS并通過激活特定的凋亡通路