重組脂聯(lián)素對氧化損傷下內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)信號分子的影響.pdf

1、目的：探討重組脂聯(lián)素對第三丁基過氧化氫(t-BHP)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)凋亡是否存在影響，同時觀察重組脂聯(lián)素對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)信號通路IRE1α-JNK的影響。
　　 方法：應(yīng)用不同濃度t-BHP(25、50、100、200、400μmol/L)誘導(dǎo)HUVECs1～24 h，MTT法觀察t-BHP作用后細(xì)胞的存活率；Hochest/PI染色熒光顯微鏡觀測細(xì)胞凋亡形態(tài)；Western blot檢測t-BHP誘導(dǎo)HU

2、VECs凋亡過程中細(xì)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)分子IRE1α、p-JNK及Caspase-3蛋白表達(dá)水平的變化。在此基礎(chǔ)上，用攜帶人脂聯(lián)素基因的重組腺病毒感染HUVECs處理，觀察重組脂聯(lián)素對t-BHP誘導(dǎo)的HUVECs凋亡是否有保護(hù)作用，以及細(xì)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)信號分子IRE1α、p-JNK及Caspase-3蛋白表達(dá)水平的變化。
　　 結(jié)果：MTT顯示，不同濃度t-BHP(25、50、100、200、400μmol/L)誘導(dǎo)HUVE

3、Cs1～24 h后，發(fā)現(xiàn)隨著t-BHP作用濃度的增加和時間的延長，可明顯抑制HUVECs的生長，并呈現(xiàn)一定的量效和時效關(guān)系。不同濃度t-BHP處理8 h后，Hochest/PI染色熒光顯微鏡下顯示，隨著t-BHP濃度的增加，HUVECs的損傷更明顯，細(xì)胞凋亡率隨之升高；ER應(yīng)激相關(guān)信號蛋白IRE1α、p-JNK及凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)增加。采用攜帶人脂聯(lián)素基因的重組腺病毒感染HUVECs預(yù)處理，可以明顯減輕t-BHP誘導(dǎo)的HUV