高親和力IgE受體α鏈基因克隆、表達及自身免疫性慢性蕁麻疹發(fā)病機制的研究.pdf

1、制備出可作為檢測抗原的可溶性FcεRⅠα蛋白,建立一種簡便、可靠的檢測抗Fc￡RⅠα自身抗體的方法.了解慢性蕁麻疹患者中自身免疫性慢性蕁麻疹的比例及抗Fc￡RⅠα自身抗體的陽性率,研究慢性蕁麻疹患者血清中組胺釋放活性及其與抗FcεRⅠα自身抗體的關系;分析自身免疫性慢性蕁麻疹的臨床特點和嗜酸細胞活化情況,進一步探討自身免疫性慢性蕁麻疹的發(fā)病機制.方法:應用分子克隆和DNA重組技術,通過皮膚組織中總RNA的提取、RT-PCR擴增、重組質粒

2、構建、連接產(chǎn)物轉化及重組子篩選鑒定,對FcεRⅠα基因進行克隆,并作測序和序列對比分析;繼而通過將目的片段與高效表達載體連接,構建重組質粒并轉入表達宿主菌,誘導表達并純化Fc￡RⅠα融合蛋白.在自體血清皮膚試驗(ASST)的基礎上,通過肥大細胞組胺釋放試驗檢測慢性蕁麻疹患者血清組胺釋放活性因子.以Fc￡RⅠα融合蛋白為抗原,用ELISA和免疫印跡法檢測慢性蕁麻疹患者血清中抗Fc￡RⅠα自身抗體,并通過抗Fc￡RⅠα自身抗體對組胺釋放活性

3、的影響證實其功能性.同時,進行臨床資料的采集、分析,放免法測定抗甲狀腺球蛋白抗體(TG-AB)和抗甲狀腺微粒體抗體(TM-AB),Immulite化學發(fā)光免疫分析測定血清總IgE(T-IgE)和ECP水平,計數(shù)外周血EOS.結論:Fc￡RⅠα基因的克隆、表達成功,制備出可溶性Fc￡RⅠα蛋白,為抗Fc￡RⅠα抗體的檢測及自身免疫性慢性蕁麻疹發(fā)病機制的研究提供了條件.部分慢性蕁麻疹患者血清中存在組胺釋放活性因子,這種組胺釋放活性因子與其血

4、清中的抗Fc￡RⅠα自身抗體有關,抗Fc￡RⅠα自身抗體可直接活化肥大細胞,釋放組胺等血管活性介質,引起蕁麻疹的發(fā)生.自身免疫性慢性蕁麻疹的臨床表現(xiàn)與一般的CIU有所不同,多表現(xiàn)為較嚴重的慢性蕁麻疹,并較易伴發(fā)其它自身免疫性疾病.非自身免疫性慢性蕁麻疹的發(fā)病與Ⅰ型變態(tài)反應有關,存在T淋巴細胞亞群的失衡,而自身免疫性慢性蕁麻疹的發(fā)病機制可能與此無關.慢性蕁麻疹患者均有不同程度EOS的活化,而自身免疫性慢性蕁麻疹患者EOS活化更明顯,且血清