轉(zhuǎn)RCH10和AGLU1基因水稻后代的分子細(xì)胞學(xué)檢測及抗紋枯病的相關(guān)研究.pdf

1、由立枯絲核菌(Rhizoctonia solani Kühn)引起的水稻紋枯病是我國水稻的“三大”病害之一。目前水稻種質(zhì)庫中尚未發(fā)現(xiàn)有對紋枯病的高水平抗源，基因工程育種為選育具有廣譜抗性并且可以穩(wěn)定遺傳的抗病品種提供了可能而顯得非常重要。浙江大學(xué)首次將水稻幾丁質(zhì)酶基因RCH10和苜蓿β-1，3-葡聚糖酶基因AGLU1雙價基因表達(dá)盒Z100轉(zhuǎn)化水稻，獲得了轉(zhuǎn)基因水稻并篩選出抗紋枯病株系YH-19和YH-24。 本研究對篩選出的抗紋

2、枯病轉(zhuǎn)基因水稻株系YH-19和YH-24的第六代(T6)進(jìn)行了表達(dá)盒中基因的遺傳穩(wěn)定性及抗病性分析。PCR檢測發(fā)現(xiàn)所有被檢測的T6代轉(zhuǎn)基因植株保留NPTII基因，而15％的植株發(fā)生RCH10基因或AGLU1基因的丟失，其中1株被檢植株甚至丟失了RCH10和AGLU1雙基因。對保留RCH10和AGLU1雙基因的T6轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行Northern雜交和GUS組織化學(xué)染色的結(jié)果表明RCH10和AGLU1雙基因在這些T6轉(zhuǎn)基因植株中表達(dá)。這些保

3、留RCH10和AGLU1雙基因的T6轉(zhuǎn)基因植株在接種紋枯菌后表現(xiàn)出的抗性顯著強(qiáng)于野生型水稻。 相應(yīng)地，這些保留RCH10和AGLU1雙基因的T6轉(zhuǎn)基因植株中的幾丁質(zhì)酶和β-1，3-葡聚糖酶活性顯著高于野生型植株中的。免疫金標(biāo)記幾丁質(zhì)酶和β-1，3-葡聚糖酶也顯示二者在轉(zhuǎn)基因植物葉細(xì)胞中的含量顯著高于在野生型植物葉細(xì)胞中的，而且RCH10和AGLU1在轉(zhuǎn)基因植物葉細(xì)胞的葉綠體中積累。 本研究進(jìn)一步建立了用臺盼藍(lán)或卡拉唑黑E