轉(zhuǎn)RIPs基因甜菜后代分子檢測與抗叢根病性鑒定.pdf

1、甜菜是我國北方重要的經(jīng)濟(jì)作物，也是世界上重要的糖料作物。在甜菜生產(chǎn)中受到諸多病害的危害，其產(chǎn)量和品質(zhì)受到嚴(yán)重的影響。甜菜壞死黃脈病毒侵染甜菜后產(chǎn)生叢根癥狀（Rhizomania），并導(dǎo)致田菜產(chǎn)質(zhì)量大幅下降。在對甜菜病害的防治方法中，選育優(yōu)良抗病品種是最有效而根本的途徑。核糖體失活蛋白（RIPS）是對病毒、真菌、細(xì)菌等都具有抗性的一類可以抑制病原生長增殖的蛋白質(zhì)。
　　本實(shí)驗(yàn)在本課題組已獲得轉(zhuǎn) RIPs基因甜菜基礎(chǔ)上，采用PCR、R

2、T-PCR方法對第一代和第二代轉(zhuǎn) RIPs基因甜菜進(jìn)行外源基因整合和轉(zhuǎn)錄水平的分子鑒定，以揭示轉(zhuǎn) RIPs基因甜菜的遺傳穩(wěn)定性。將分子鑒定結(jié)果為陽性的轉(zhuǎn)基因植株種植在叢根病病圃中，進(jìn)行體內(nèi)叢根病病原——壞死黃脈病毒 Western blot檢測、形態(tài)、產(chǎn)質(zhì)量鑒定以及生理特性的研究，以闡明轉(zhuǎn) RIPs基因甜菜的抗叢根病性，為甜菜抗病分子育種創(chuàng)建新材料。實(shí)驗(yàn)取得的結(jié)果如下：
　　1利用PCR技術(shù)對轉(zhuǎn)基因甜菜第一代和第二代植株進(jìn)行檢測，

3、篩選出具有目的基因的植株，初步證明 RIPs基因已經(jīng)整合到甜菜基因組 DNA上，轉(zhuǎn) RIPs基因甜菜具有較好的遺傳穩(wěn)定性。利用RT-PCR檢測 RIPs基因表達(dá)量，表明該基因能夠在轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)。研究結(jié)果為甜菜抗病分子育種提供新材料。
　　2將轉(zhuǎn) RIPs基因甜菜分別種植于無病地與叢根病地上，以野生型甜菜為對照，在形態(tài)、產(chǎn)量、品質(zhì)方面進(jìn)行對比。結(jié)果表明，無病地上，轉(zhuǎn)基因甜菜形態(tài)正常，轉(zhuǎn) RIPs基因甜菜平均單株重低于野生型甜菜，平均

4、含糖率高于野生型甜菜；在叢根病地上，野生型甜菜葉片黃化，根發(fā)育受阻，根小，表現(xiàn)出感病癥狀，而轉(zhuǎn)基因甜菜形態(tài)無異常，表現(xiàn)出抗病性。轉(zhuǎn) RIPs基因甜菜的平均單株重高于野生型，平均含糖率較野生型的低。
　　3 BNYVV Western blot檢測結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因甜菜塊根中病毒含量顯著低于野生型甜菜，RIPs基因的轉(zhuǎn)入可抑制 BNYVV的繁殖，從而提高了甜菜的抗叢根病性。
　　4對轉(zhuǎn)基因甜菜植株進(jìn)行光合作用、氮代謝、防御酶系等生