Ospgip基因在水稻抗紋枯病育種上的應(yīng)用.pdf

1、多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(Polygalacturonase inhibiting protein，PGIP)是一種植物細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)蛋白，可特異性結(jié)合真菌內(nèi)切多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonases，PG)，從而抑制其活性，在植物抗真菌病害過(guò)程中起重要作用。本研究具體結(jié)果如下:
　　通過(guò)PCR技術(shù)克隆了Ospgip1基因，該基因具有一930bp的完整開(kāi)放閱讀框(ORF)，無(wú)內(nèi)含子，終止密碼子為T(mén)AA。將其與超表達(dá)載體p

2、CMBIA1301連接，以農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入粳稻品種徐稻3號(hào)愈傷組織超表達(dá)，并對(duì)轉(zhuǎn)化植株后代進(jìn)行田間抗性鑒定，篩選獲得對(duì)紋枯病抗性有顯著提高的水稻新品系。大田抗病性鑒定結(jié)果表明，可降低病級(jí)1.0～1.2級(jí)（9級(jí)分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)），農(nóng)藝性狀與親本無(wú)顯著差異。
　　同法克隆Ospgip2基因，該基因具有1029bp的完整開(kāi)放閱讀框（ORF），無(wú)內(nèi)含子，終止密碼子為T(mén)AA。生物信息學(xué)分析表明，OsPGIP2由342個(gè)氨基酸組成，含有10個(gè)LRR重

3、復(fù)序列。將對(duì)水稻紋枯病菌PG無(wú)抑制活性的OsPGIP2 LRR區(qū)氨基酸進(jìn)行點(diǎn)突變，通過(guò)對(duì)表達(dá)產(chǎn)物的提取和測(cè)定，選擇表達(dá)產(chǎn)物獲得對(duì)PG抑制活性的突變體轉(zhuǎn)入水稻，以期獲得抗性明顯提高的水稻抗紋枯病新品系。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)與生物學(xué)信息分析結(jié)果設(shè)計(jì)引物，分別替換OsPGIP2 LRR區(qū)3個(gè)氨基酸，獲得突變體OsPGIP2L233F、OsPGIP2R253Q和OsPGIP2Q3OOH。突變體原核表達(dá)結(jié)果表明，將OsPGIP2第233位氨基酸由L突變成F