六種小鼠腫瘤遺傳改變的AFLP分析及其差異片段的克隆.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文六種小鼠腫瘤遺傳改變的AFLP分析及其差異片段的克隆姓名：梁智勇申請學位級別：博士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：史景泉魏泓2001.5.1顯示高、低轉(zhuǎn)移性肝癌Hca／16A3F與Hca／A2P基因組闊存在差異，4對雙酶切AFLP引物擴增結果顯示二者間存在差異。應用單酶切AFLP法檢測到8條差異片段，應用雙酶切AFLP法共檢測到2l條差異片段。提示腫瘤在發(fā)生、發(fā)展過程中出現(xiàn)了基因組變異，這些變異可能是由于基因突

2、變、缺失、擴增或重組等改變引起的。3對差異明顯、重復性好的29條片段進行回收，再擴增后與pUCmT載體連接，應用JMl09大腸桿菌轉(zhuǎn)化克隆，經(jīng)篩選后測序。(1)建立了簡便的銀染聚丙烯酰胺凝膠回收DNA片段方法半玻板凝膠染色法。(2)3條克隆片段進行測序，經(jīng)BLAST搜尋未見同源性序列，提示可能是新的基因序列。4應用AFLP技術對10個品系小鼠進行分析。17條單酶切AFLP引物、20對雙酶切AFLP引物檢測到10個品系小鼠的多態(tài)性變化。單

3、酶切AFLP共擴出251帶，片段大小在100bp一2000bp之間，共得到89個多態(tài)位點，占總擴增帶的355％。雙酶切AFLP在50bp一600bp之間擴增出清晰條帶，統(tǒng)計1507條帶，共得到378個多態(tài)位點，占總擴增帶的251％。對多態(tài)性片段進行統(tǒng)計，計算出不同品系間的相似指數(shù)(F)和遺傳距離指數(shù)(P)，根據(jù)NJ法構建系統(tǒng)樹。結果表明昆明鼠(KM)與TA2、BALB／c、BALB／cnu關系較近：所有品系間關系最近的兩品系為BALB／