肝細(xì)胞核因子相互作用蛋白質(zhì)的研究.pdf

1、肝細(xì)胞核因子(HNF)是一群在肝臟中富集表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)控多種肝臟基因的特異表達(dá)，并參與維系肝臟的正常表型與功能。HNFs在調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的過(guò)程中需要募集多種輔助因子協(xié)同發(fā)揮作用。本研究對(duì)HNFs主要成員的蛋白質(zhì)復(fù)合體進(jìn)行了分離鑒定，并對(duì)HMG1-HNF1α相互作用介導(dǎo)的生物學(xué)功能及作用機(jī)制進(jìn)行了深入的研究。 研究采用免疫共沉淀聯(lián)合質(zhì)譜分析分離鑒定了HNF1α、HNF3α、HNF3β、HNF4α以及HNF6的相互作用候選分子，建

2、立了一套相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化的流程，分別從亞細(xì)胞定位、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域、生物學(xué)功能以及相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索四個(gè)方面對(duì)候選分子與靶蛋白之間的相互作用進(jìn)行可靠性評(píng)價(jià)。在所獲得的67個(gè)相互作用數(shù)據(jù)中，有37個(gè)分子與靶蛋白具有共同的亞細(xì)胞定位(56％)，有19個(gè)分子與靶蛋白具有直接相互作用的結(jié)構(gòu)域(28％)，有29個(gè)分子能夠參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程(43％)，有42個(gè)分子與靶蛋白之間存在間接相互作用(62％)。這些結(jié)果表明，我們獲得的蛋白質(zhì)相互作用數(shù)據(jù)具有較高的可信度。進(jìn)

3、一步通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，我們驗(yàn)證了HMG1、14-3-3zeta、CBX3以及RANBP1四種蛋白質(zhì)與HNF1α的相互作用，采用報(bào)道基因?qū)嶒?yàn)證明這四種蛋白質(zhì)可以影響HNF1α的轉(zhuǎn)錄活性，為揭示HNF1α轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用機(jī)制提供了有價(jià)值的線索。 采用免疫共沉淀、GST沉降手段驗(yàn)證了HMG1與HNF1α之間的相互作用，并確定HMG1的HMG盒結(jié)構(gòu)域與HNF1α的同源結(jié)構(gòu)域?yàn)閮烧呦嗷プ饔冒l(fā)生的區(qū)段，熒光素酶報(bào)道基因?qū)嶒?yàn)證明HMG1能夠增