肝細胞核因子相互作用蛋白質的研究.pdf

1、肝細胞核因子(HNF)是一群在肝臟中富集表達的轉錄因子，調控多種肝臟基因的特異表達，并參與維系肝臟的正常表型與功能。HNFs在調控基因轉錄的過程中需要募集多種輔助因子協(xié)同發(fā)揮作用。本研究對HNFs主要成員的蛋白質復合體進行了分離鑒定，并對HMG1-HNF1α相互作用介導的生物學功能及作用機制進行了深入的研究。 研究采用免疫共沉淀聯(lián)合質譜分析分離鑒定了HNF1α、HNF3α、HNF3β、HNF4α以及HNF6的相互作用候選分子，建

2、立了一套相對標準化的流程，分別從亞細胞定位、蛋白質結構域、生物學功能以及相關數(shù)據庫檢索四個方面對候選分子與靶蛋白之間的相互作用進行可靠性評價。在所獲得的67個相互作用數(shù)據中，有37個分子與靶蛋白具有共同的亞細胞定位(56％)，有19個分子與靶蛋白具有直接相互作用的結構域(28％)，有29個分子能夠參與轉錄調控過程(43％)，有42個分子與靶蛋白之間存在間接相互作用(62％)。這些結果表明，我們獲得的蛋白質相互作用數(shù)據具有較高的可信度。進

3、一步通過免疫共沉淀實驗，我們驗證了HMG1、14-3-3zeta、CBX3以及RANBP1四種蛋白質與HNF1α的相互作用，采用報道基因實驗證明這四種蛋白質可以影響HNF1α的轉錄活性，為揭示HNF1α轉錄調控的作用機制提供了有價值的線索。 采用免疫共沉淀、GST沉降手段驗證了HMG1與HNF1α之間的相互作用，并確定HMG1的HMG盒結構域與HNF1α的同源結構域為兩者相互作用發(fā)生的區(qū)段，熒光素酶報道基因實驗證明HMG1能夠增