小麥抗葉銹病近等基因系TcLr35的RGA分析.pdf

1、由小麥葉銹菌引起的小麥葉銹病是影響世界小麥穩(wěn)產(chǎn)高產(chǎn)的重要病害之一，也是影響我國(guó)小麥生產(chǎn)的重要因素。持續(xù)篩選抗病基因和培育抗病品種是防治小麥葉銹病發(fā)生的主要手段。小麥抗葉銹病基因Lr35最初來(lái)源于擬斯卑爾脫山羊草，通過(guò)與Triticina.monococcum的二倍體回交將其轉(zhuǎn)移到小麥品種馬奎斯中。該基因位于2B染色體上，與Sr39緊密連鎖。其抗性在二葉期開(kāi)始表達(dá)，六葉期完全表達(dá)，是一個(gè)應(yīng)用潛力很大的由主效基因控制的抗病基因。 抗

2、病基因類(lèi)似序列(RGAs)技術(shù)是利用抗病基因具有保守結(jié)構(gòu)域的特性，通過(guò)人工合成引物對(duì)基因組DNA進(jìn)行定點(diǎn)擴(kuò)增，在全基因組水平上檢測(cè)DNA變異。本試驗(yàn)以含小麥抗葉銹病基因Lr35的近等基因系材料TcLr35和感病親本Thatcher以及其它小麥抗葉銹病近等基因系材料進(jìn)行RGA分析。主要結(jié)果如下: 根據(jù)已克隆的植物抗病基因普遍具有的NBS和LRR結(jié)構(gòu)域設(shè)計(jì)49條RGA引物，組成260對(duì)引物組合，從近等基因系TcLr35中擴(kuò)增獲得4條

3、特異性片段。其中引物對(duì)Pto-kin1IN/XL,RR-INV1從近等基因系TcLr35中擴(kuò)增獲得一條747bp的穩(wěn)定特異性片段。以本實(shí)驗(yàn)室保存的49個(gè)小麥抗葉銹病近等基因系材料進(jìn)行擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)此條帶僅在TcLr35中存在，而在其他48個(gè)小麥抗葉銹病近等基因系材料及感病親本Thatcher中均未出現(xiàn)，說(shuō)明該片段特異性很強(qiáng)。對(duì)該特異性片段進(jìn)行序列測(cè)定與分析，經(jīng)BLAST比較，表明該片段與許多已克隆出來(lái)的小麥基因序列相似:與Triticumm

4、onococcum DV92的BAC克隆231A16有84％的同源性，與Triticum urartu clone BAC210J24有96％同源性；與Triticum turgidum subsp.durum clone BAC 221H19有90％同源性；與Triticum urartu clone BAC 41C8有89％同源性；與Triticum urartu clone BAC292N12有88％同源性等。對(duì)該特異性片段進(jìn)行蛋