轉牛MyoG和Myf6基因F1代小鼠脾臟免疫功能的比較.pdf

1、轉基因技術是上世紀80年代發(fā)展起來的一項生物技術，在此基礎上，人們開始制備帶有優(yōu)良性狀的轉基因動物，將轉基因動物應用到畜牧業(yè)、醫(yī)藥產業(yè)、生命科學、食品科學等領域中去，使轉基因動物的研究蓬勃發(fā)展，展現出良好的應用前景，受到人們的廣泛關注。
　　近二十年來，轉基因動物研究發(fā)展迅速，獲得了多種轉基因動物，但在畜牧生產中，轉基因家畜要達到商業(yè)化育種還有很多問題亟待解決，例如，轉基因動物抗病力低、死亡率高、生產性能低下等，這不僅嚴重影響了轉

2、基因動物的健康，對人類健康、社會穩(wěn)定和環(huán)境安全也存在著潛在的威脅。
　　為了研究外源基因導入對宿主免疫功能的影響，我們選擇F1代轉MyoG和Myf6基因小鼠為研究對象，通過RT-PCR、MTT和ANAE等方法，研究外源基因整合對宿主脾臟的細胞免疫和體液免疫及相關細胞因子mRNA表達水平的影響，進一步推動了轉基因技術在遺傳育種上的應用。本文研究主要內容如下:
　　1)提取了F1代轉基因小鼠的基因組，采用普通PCR方法對小鼠DN

3、A進行鑒定，篩選具有外源基因的小鼠作為后續(xù)研究對象。結果顯示，共獲得6只轉牛MyoG基因小鼠和7只轉牛Myf6基因小鼠。
　　2)采用絕對熒光定量PCR法檢測了F1代小鼠的拷貝數。結果顯示，轉MyoG基因小鼠大多為6-7個拷貝，轉牛Myf6基因小鼠則是1-2個拷貝。
　　3)檢測了轉基因小鼠的脾臟指數、淋巴細胞增殖能力、T淋巴數量與淋巴細胞凋亡率。結果顯示:轉基因小鼠在脾臟指數、淋巴細胞增殖能力均顯著下降;T淋巴細胞數量在轉

4、牛Myf6基因小鼠中均極顯著降低(P＜0.01)，在轉牛MyoG基因中小鼠中也下降了，但個別差異不顯著;淋巴細胞凋亡凋亡率極顯著升高(P＜0.01)，表明轉基因小鼠的免疫功能受抑制。
　　4)通過熒光定量PCR檢測轉基因小鼠的脾臟IL-2、IFN-γ、 IL-4、IL-6及TNF-a mRNA表達情況。結果顯示，轉牛MyoG和轉牛Myf6基因小鼠脾臟中IL-2和IFN-γ mRNA的表達下降，證明外源基因插入抑制了宿主脾臟的細胞免

5、疫功能;轉Myf6小鼠IL-4的表達顯著降低，而轉牛MyoG基因小鼠的降低不明顯，證明外源基因的插入會抑制小鼠的體液免疫;部分轉牛MyoG和Myf6基因小鼠中IL-6和TNF-a表達上調，提示外源基因的插入使機體免疫力下降并且發(fā)生了炎癥反應。
　　5)比較兩種轉?；蛐∈蟮耐庠椿蚩截悢蹬c機體免疫力之間的關系，發(fā)現轉牛MyoG小鼠的外源基因拷貝數明顯多于轉牛Myf6小鼠，但是轉牛MyoG小鼠的脾臟指數、T和B淋巴細胞增殖能力及T淋