Tiam1轉(zhuǎn)基因小鼠的建立及其功能研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文Tiam1轉(zhuǎn)基因小鼠的建立及其功能研究姓名：于莉娜申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：丁彥青20090409中文摘要將外源基因?qū)雱游矬w內(nèi)的重要方法，以此方法得到的能正常繁衍的動物稱為轉(zhuǎn)基因動物( T r a n s g e n i c a n i m a l s ) 。M a l l i r i 曾應(yīng)用在體R N A 干擾技術(shù)建立了T i a m l 沉默小鼠進行小鼠皮膚癌研究，結(jié)果顯示T i

2、a m l 沉默小鼠皮膚癌的發(fā)生率明顯降低，并且腫瘤進展緩慢，認為T i a m l 在R a s 誘導(dǎo)皮膚癌發(fā)生的啟動和進展階段發(fā)揮關(guān)鍵作用，這一效應(yīng)與T i a m l 表達量有顯著相關(guān)性。目前尚沒有T i a m l 轉(zhuǎn)基因動物模型。由于在正常組織中，T i a m l 基因除了在正常腦、睪丸和皮膚中高表達外，在其他組織低表達或不表達，因此建立T i a m l 轉(zhuǎn)基因小鼠，能夠為整體水平研究T i a m l 基因功能和作用機制

3、提供理想動物模型。建立轉(zhuǎn)基因小鼠方法主要有四種，應(yīng)用比較多的方法是受精卵原核顯微注射技術(shù)和慢病毒感染技術(shù)。原核顯微注射法為目前最經(jīng)典的和最成熟制備轉(zhuǎn)基因小鼠的方法，被廣泛采用，但是顯微注射制備轉(zhuǎn)基因動物的效率很低。慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，可以感染分裂和非分裂細胞，并穩(wěn)定整合到細胞的基因組內(nèi)，因此，它是一個極好的基因?qū)牍ぞ?。本研究所用的慢病毒載體是一個自我失活載體，攜帶一個G F P 報告基因，即增強了載體的安全性，又提高了攜帶基因的

4、檢出率。本研究擬建立p C D F l ．T i a m l —c o p G F P 慢病毒表達載體，并轉(zhuǎn)染內(nèi)源性不表達T i a m l 的結(jié)直腸癌H T 2 9 細胞株，細胞水平探討T i a m l 的生物學(xué)功能，同時驗證所構(gòu)建慢病毒載體的正確性；通過慢病毒卵周隙顯微注射的轉(zhuǎn)基因方法制備T i a m l 轉(zhuǎn)基因小鼠，并觀察其陽性表型，檢測增殖標(biāo)志物K i ．6 7 ，探討T i a m l 在活體內(nèi)整體水平的生物學(xué)功能，并為T