HB-EGF轉(zhuǎn)基因小鼠的建立和功能研究.pdf

1、擴(kuò)張性心肌癥是最常見的心臟疾病之一，是導(dǎo)致心臟衰竭的第三大常見原因。選擇性ErbB2剔除的小鼠為研究ErbB2受體特異的抑制劑赫賽汀所引起的擴(kuò)張性心肌病和心力衰竭提供了動(dòng)物模型?，F(xiàn)已證實(shí)ErbBs信號(hào)系統(tǒng)在胚胎期心臟的發(fā)育過程中和維持成體心臟的功能方面都具有重要的作用。HB-EGF是ErbB受體的主要配體之一，HB-EGF通過ErbB受體介導(dǎo)的信號(hào)通路在維持心臟的正常功能和心臟瓣膜的發(fā)育中起非常重要的作用。 我們建立了動(dòng)物模型來

2、進(jìn)一步闡明HB-EGF和ErbB受體在心臟功能和發(fā)育中的作用。本論文分為兩個(gè)部分，第一部分：建立HB-EGF的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型。第二部分：利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型研究HB-EGF的功能。 首先我們構(gòu)建了α-MHC-HB-EGF表達(dá)載體。為了提高HB-EGF在小鼠體內(nèi)的表達(dá)，將HB-EGF的編碼序列插入到在小鼠心臟組織中特定表達(dá)的α-MHC啟動(dòng)子的下游，然后酶切成線性DNA。把構(gòu)建的線性α-MHC-HB-EGF注射到受精卵的雄原核中，使其

3、發(fā)育成攜帶有HB-EGF的轉(zhuǎn)基因小鼠。通過PCR的方法鑒定轉(zhuǎn)基因的首建鼠。我們得到了兩只HB-EGF陽性的首建鼠。Westernblotting發(fā)現(xiàn)16號(hào)小鼠中HB-EGF在心臟中的表達(dá)與同窩陰性對(duì)照小鼠相比蛋白表達(dá)明顯增加。 取HB-EGF在心臟中特異性高表達(dá)的16號(hào)陽性轉(zhuǎn)基因小鼠的F1代與同窩陰性對(duì)照小鼠，腹腔注射BrdU(每kg體重10ml)，2h后取出心臟，固定于4％多聚甲醛中，做石蠟切片，用小鼠生物素標(biāo)記的BrdU抗體