2型糖尿病患者巨噬細(xì)胞HB-EGF mRNA表達(dá)的半定量研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目前,對(duì)于巨噬細(xì)胞分泌的HB-EGF和糖尿病的關(guān)系,及糖尿病巨噬細(xì)胞HB-EGF表達(dá)調(diào)節(jié)的相關(guān)報(bào)道很少.該課題擬采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)分析糖尿病患者巨噬細(xì)胞HB-EGF的mRNA表達(dá)水平,探討HB-EGF在糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化中可能的作用.研究對(duì)象為該院就診的44例2型糖尿病患者,和34例性別、年齡、體重指數(shù)與之匹配的正常對(duì)照者.取外周血,用Ficoll分離得到單個(gè)核細(xì)胞,根據(jù)單核細(xì)胞對(duì)塑料的貼壁特性,在塑料培養(yǎng)皿中用PRMI1640培

2、養(yǎng)基分離培養(yǎng),并以20﹪自體血清刺激分化為巨噬細(xì)胞.4天后收集巨噬細(xì)胞,用免疫組化法證實(shí).用Trizol提取巨噬細(xì)胞的總RNA,以O(shè)ligo dT為引物逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,采用合成的特異性引物(HB-EGF:上游TGG TGC TGA AGC TCT TT以TGG,下游GTG GGA ATT AGT CAT GCC CAA;β-actin:上游TCG ACA ACG GCT CCG GCA,下游CGT ACA TGG CTG GGG TG

3、T)進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng),得到目的片段HB-EGF605bp,其中β-actin370bp為內(nèi)參照.2﹪凝膠電泳分離擴(kuò)增產(chǎn)物后,回收純化目的片段,直接測(cè)序.將電泳條帶用凝膠成像系統(tǒng)分析軟件進(jìn)行定量分析,計(jì)算HB-EGF的相對(duì)表達(dá)量.結(jié)果顯示,與對(duì)照組HB-EGF mRNA水平(0.473±0.210)相比,2型糖尿病巨噬細(xì)胞HB-EGF mRNA水平(0.876±0.422)明顯增高(P<0.05),而且HB-EGF mRNA表達(dá)水平與空腹

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