心臟組織特異性表達(dá)Neuregulin--2轉(zhuǎn)基因小鼠的建立及心臟功能分析.pdf

1、碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼：10023學(xué)弓：$2011007007心臟組織特異性表Neuregulin2轉(zhuǎn)基因小鼠的建立及心臟功能分析所院：姓名：指導(dǎo)教師：導(dǎo)師小組：學(xué)科專(zhuān)業(yè)：研究方向：完成日期：醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所路迎冬高虹張連峰高虹教授張連峰教授比較醫(yī)學(xué)NRG2對(duì)心臟結(jié)構(gòu)和功能研究二零一四年四月中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩。1二學(xué)位論文第一部分心臟組織特異性表達(dá)Neuregulin2轉(zhuǎn)基因小鼠的建立及心臟功能分析摘要目的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白(Ne

2、uregulins，NRGs)是神經(jīng)系統(tǒng)及心臟等器官中介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞之間相互作用的信號(hào)蛋白，屬于表皮生長(zhǎng)因子家族成員，參與細(xì)胞增殖、分化及細(xì)胞形態(tài)的形成。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(Neuregulin2，NRG2)是NRGs家族成員，能夠促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，敲除該基因的小鼠表現(xiàn)為早期生長(zhǎng)遲緩，NRG2在心臟中也有表達(dá)，但其在心臟發(fā)育尤其是病理刺激時(shí)對(duì)心臟結(jié)構(gòu)及功能的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。本文目的是建立心臟組織特異性表達(dá)NRG2轉(zhuǎn)基因小鼠，分析其在正常及

3、壓力負(fù)荷刺激時(shí)對(duì)心臟結(jié)構(gòu)及功能的影響。方法利用分子生物學(xué)方法，將人NRG2基因克隆到qMHC啟動(dòng)子下游，構(gòu)建NRG2轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體，利用顯微注射技術(shù)建立NRG2轉(zhuǎn)基因小鼠，PCR鑒定小鼠的基因型，WesternBlot鑒定NRG2蛋白在心臟中的表達(dá)并篩選高表達(dá)的轉(zhuǎn)基因品系，主動(dòng)脈縮窄術(shù)(Transverseaorticconstriction，TAC)制備壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的心肌肥厚小鼠模型，利用超聲影像分析和病理學(xué)觀(guān)察小鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能改變

4、。結(jié)果成功構(gòu)建了NRG2轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體，通過(guò)WesternBlot實(shí)驗(yàn)篩選出了心臟組織特異性高表達(dá)NRG2轉(zhuǎn)基因小鼠品系。超聲影像結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因小鼠左心室舒張末期后壁厚度(LVPWD)比同窩陰性轉(zhuǎn)基因小鼠明顯增加，3月齡時(shí)可達(dá)156％(pO05)，經(jīng)壓力負(fù)荷刺激后，NRG2轉(zhuǎn)基因手術(shù)小鼠心室壁增厚程度顯著下降，心室腔增大，同時(shí)心肌排列紊亂程度和纖維化程度明顯比NTG手術(shù)小鼠嚴(yán)重。結(jié)論本研究成功建立了高表達(dá)NRG2的轉(zhuǎn)基因小鼠，與同