囊型肝包蟲囊周肝組織與正常肝組織差異基因與差異蛋白的初步篩選及研究.pdf

1、目的：(1)以綿羊自然發(fā)病肝包蟲病例為研究對(duì)象,對(duì)該病例進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察及分期。為臨床治療和防治肝包蟲病提供理論參考依據(jù)。(2)探討囊型肝包蟲囊周肝組織與正常肝組織的差異表達(dá)基因。(3)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法,建立人肝包蟲囊周肝組織及正常肝組織的二維電泳圖譜,篩選囊周肝組織與正常肝組織間差異表達(dá)蛋白,期望得到肝包蟲發(fā)生發(fā)展相關(guān)蛋白。 方法：(1)采用石蠟包埋、切片、HE染色法對(duì)40例自然發(fā)病肝包蟲綿羊進(jìn)行鏡檢,分析結(jié)果。(2)取囊型

2、肝包蟲病人囊周肝組織與正常肝組織,應(yīng)用抑制差減雜交技術(shù)構(gòu)建正、反向差減雜交文庫(kù)。經(jīng)酶切鑒定存在表達(dá)差異的陽(yáng)性克隆送去測(cè)序,測(cè)序結(jié)果Sequence Scanner V1.0去除酶切位點(diǎn),再經(jīng)B1axtn和Genbank公共數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)。(3)收集術(shù)后新鮮肝包蟲囊周肝組織和距包囊5厘米以上正常肝組織保存于液氮中備用。提取組織總蛋白,采用雙向凝膠電泳(2-DE)技術(shù)得到各組凝膠圖譜。 結(jié)論：(1)根據(jù)綿羊肝包蟲病理發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸

3、不同,可將肝包蟲的病理改變過程分為兩種類型。其一：肝竇擴(kuò)張期、炎細(xì)胞滲出期、肉芽腫形成期、匯管區(qū)周圍纖維組織增生期、囊腫形成期。其二：肝竇擴(kuò)張期、炎細(xì)胞滲出期、肉芽腫形成期、壞死期、膿腫灶形成期,膿腫液被吸收、消散、形成鈣化灶。并依其疾病的發(fā)展程度,將肝竇擴(kuò)張期、炎細(xì)胞滲出期歸為輕度,肉芽腫期、匯管區(qū)周圍纖維組織增生期歸為中度,囊腫形成期歸為重度。(2)共篩選出陽(yáng)性克隆306個(gè),其中正向差減文庫(kù)陽(yáng)性克隆292個(gè),反向差減文庫(kù)陽(yáng)性克隆14