不同來源白色念珠菌的分離鑒定及其致病性分析.pdf

1、白色念珠菌(Candida albicans)，又稱白假絲酵母，是一種重要的人畜共患條件致病性真菌，當宿主免疫功能低下時不僅可以導致淺表感染（如陰道炎和鵝口瘡），也能導致致命性的深部感染（系統(tǒng)感染）。由于廣譜抗菌素的廣泛使用、器官移植和體內(nèi)導管植入等醫(yī)療技術(shù)的應用以及免疫抑制疾病的增多，白色念珠菌感染已成為臨床上和生產(chǎn)上日益嚴重的問題。隨著抗真菌藥物的使用，白色念珠菌對一種或多種抗真菌藥物耐藥的現(xiàn)象日趨增多，體外抗真菌藥物敏感性試驗在指

2、導合理用藥以及檢測病原菌對藥物的耐藥趨勢方面發(fā)揮越來越大的作用。盡管念珠菌病流行且后果嚴重，其致病機制尚未被詳盡闡述。本研究旨在分離不同來源的白色念珠菌，并分析分離株的毒力和表型特性。篩選的強弱毒株可用于研究白色念珠菌的致病機制。此外，本試驗采用的雞系統(tǒng)性感染模型能更好的模擬宿主-病原菌的相互作用，有助于增進對白色念珠菌和宿主共進化的認識和揭示白色念珠菌的感染機理。試驗具體分為以下幾個部分:
　　1.不同來源白色念珠菌的分離鑒定及

3、體外藥敏試驗
　　本研究利用念珠菌顯色培養(yǎng)基和5.8S-ITS序列分析分離了100株白色念珠菌。體外藥敏試驗結(jié)果顯示，分離株對5-氟胞嘧啶和氟康唑敏感性很高(敏感率分別為95.2％、100％);對兩性霉素B的敏感率為59.5％，耐藥率為19.0％。
　　2.白色念珠菌分離株的毒力分析
　　本研究用鼠系統(tǒng)性感染模型，根據(jù)存活率、器官真菌負荷分析了分離株的毒力。結(jié)果顯示，不同菌株毒力不同，其中分離株J1（雞源）和G2（鴿源

4、）毒力差異顯著。考慮到菌株毒力可能受宿主種類的影響，我們分別用雞/鴿系統(tǒng)性感染模型再次分析分離株J1和G2的毒力，結(jié)果表明J1毒力依舊明顯強于G2。即篩選出強毒株J1和弱毒株G2。
　　3.強弱毒株表型和基因?qū)W特性分析
　　分析了強弱毒株對高溫、酸堿、氧化壓、滲透壓的耐受力等表型特性和部分毒力相關(guān)基因(ALS1、ALS3、HWP1、EFG1、HSP90和SAP1-6)mRNA表達水平的差異。研究結(jié)果顯示，強弱毒株對高溫、酸堿

5、、氧化壓、滲透壓的耐受力相似，但弱毒株G2對剛果紅的敏感性高于J1。G2對剛果紅更易感，表明其細胞壁完整性受損，可能因此更易被宿主免疫系統(tǒng)清除，導致毒力減弱。此外，相對熒光定量的結(jié)果顯示，攻毒后24 h和/或48 h后，除了HSP90、SAP1、SAP4和SAP6，其余基因在強毒株J1中的轉(zhuǎn)錄水平均高于（≥1.5倍）弱毒株G2。ALS1、ALS3、HWP1和EFG1的表達上調(diào)可部分解釋分離株J1毒力強于G2。攻毒24 h和48 h后SA