大鼠真菌性腹腔炎癥滲出液對白色念珠菌殺菌作用的研究.pdf

1、【目的】用白色念珠菌誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生真菌性腹腔感染模型，對腹腔炎癥滲出液中抗真菌物質(zhì)的殺菌活性進(jìn)行研究，為將來開發(fā)與傳統(tǒng)抗真菌藥物不同的源于體內(nèi)天然存在的新型抗真菌藥物提供理論依據(jù)。 【方法】給大鼠腹腔內(nèi)注射白色念珠菌生理鹽水溶液誘導(dǎo)產(chǎn)生真菌性腹腔感染模型，收集腹腔炎癥滲出液，對腹腔炎癥滲出液進(jìn)行1．用瑞士染色法對涂片進(jìn)行染色，觀察各時段腹腔炎癥滲出液中細(xì)胞類型。2．紫外法測定12hr腹腔炎癥滲出液中蛋白含量。3．殺菌活性測定：將不

2、同濃度的滲出液、滲出液上清夜和細(xì)胞分別與白色念珠菌在37℃共同孵育2hr，然后稀釋成合適的濃度，取100u1均勻分散在營養(yǎng)培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)48hr，計算菌落數(shù)(CFU)，計算殺菌率；測12hr滲出液上清液對熱帶念珠菌和光滑念珠菌的殺菌活性。4．腹腔炎癥滲出液中抗真菌物質(zhì)熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。5．腹腔炎癥滲出液中抗真菌物質(zhì)對白色念珠菌作用機(jī)制的初步探討。 【結(jié)果】1．給大鼠腹腔注射白色念珠菌誘導(dǎo)產(chǎn)生真菌性感染模型，有大量的腹腔炎癥滲出

3、液滲出，在12hr滲出液達(dá)4950ul。腹腔炎癥滲出液中細(xì)胞大量增多，在12hr細(xì)胞濃度為3.53×10<'7>個/ml，是對照組的6.63×10<'6>個/ml的5倍多，腹腔炎癥滲出液以中性粒細(xì)胞為主，對照組以巨嗜細(xì)胞為主。2．腹腔炎癥滲出液中蛋白質(zhì)的含量為41.75±2.92mg/ml，是對照組19.32±0.86mg/ml的兩倍多，蛋白總量是對照組的50倍多。3．(1)腹腔炎癥滲出液對白色念珠菌有強(qiáng)大的殺菌作用，上清液和細(xì)胞對白色

4、念珠菌的殺菌活性相差不大。(2)不同時段不同濃度的腹腔滲出液上清液對白色念珠菌都有殺滅活性，殺菌活性呈濃度效應(yīng)關(guān)系，其中以12hr腹腔炎癥滲出液上清液殺滅白色念珠菌活性最強(qiáng)，僅0.8％腹腔炎癥滲出液上清液的殺菌率就有91.23±6.12％。(3)腹腔炎癥滲出液上清液對熱帶念珠菌和光滑念珠菌也具有強(qiáng)殺滅作用，其中對光滑念珠菌的作用相對較弱。4．腹腔炎癥滲出液中殺滅白色念珠菌的物質(zhì)對熱不穩(wěn)定，12hr腹腔炎癥滲出液上清掖的20％濃度在56℃

5、十分鐘水浴加熱后殺菌率由37℃的97.6±6.31％下降到9.10±2.56％，殺菌活性明顯下降。5．腹腔炎癥滲出液上清液和白色念珠菌作用40分鐘后，菌體形態(tài)開始改變，菌體顏色變暗，菌體變小，菌體輪廓開始變得模糊，90分鐘后，菌體進(jìn)一步變小，顏色變黑，最后菌體破碎而死亡。 【結(jié)論】我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大鼠真菌性腹腔炎癥滲出液對白色念珠菌有強(qiáng)大的殺菌作用，有關(guān)內(nèi)容國內(nèi)外尚無報道。初步分析，滲出液中抗真菌物質(zhì)可能是一種或多種抗真菌蛋