生長(zhǎng)抑素治療腸道白色念珠菌感染小鼠的實(shí)驗(yàn)性研究.pdf

1、目的：
　　探討生長(zhǎng)抑素在治療腸道白色念珠菌感染的模型小鼠中小鼠腸粘膜的變化從而進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。
　　方法：
　　將健康SPF級(jí)昆明小鼠100只（5周齡，體重20±4g）隨機(jī)分為4組，每組25只，因操作失誤或外界原因?qū)е律倭啃∈笏劳黾霸炷＝M及治療組在造模后隨機(jī)抽取2只確定造模是否成功，最終確定為對(duì)照組、假造模組、造模組及治療組各20只。用硫酸鏈霉素(Streptomycin，S，100mg/ml)0.4ml對(duì)假造

2、模組、造模組和治療組灌胃導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)，同時(shí)以環(huán)磷酰胺(Cyclophosphamide，CTX，50mg/kg)腹腔注射（Intraperitone，i.p.）以降低小鼠免疫力，均連續(xù)5天，對(duì)照組用無(wú)菌生理鹽水(Normal Saline，NS)做相應(yīng)處理;造模組和治療組經(jīng)上述處理后以濃度為1.6×109的白色念珠菌(Candida albicans，CB)懸液灌胃0.5ml導(dǎo)致小鼠腸道白色念珠菌感染，從而建立腸道白色念珠菌感染的小

3、鼠模型，對(duì)照組和假造模組用NS做相應(yīng)處理;治療組在白色念珠菌灌胃后24h開始給予濃度為0.08mg/ml生長(zhǎng)抑素(Somatostatin，SST)尾靜脈注射（0.2ml/只），每8小時(shí)一次，對(duì)照組、假造模組和造模組用NS做相應(yīng)處理，各組小鼠在實(shí)驗(yàn)期間正常飲食，連續(xù)5天，每天注意觀察小鼠一般情況，如精神和腹瀉情況等;5天后處死小鼠，無(wú)菌取出回盲部，收集回盲部近、遠(yuǎn)端各1cm腸粘膜組織進(jìn)行白色念珠菌菌落計(jì)數(shù)，病理切片顯微鏡下病理評(píng)分，用T

4、unel法及免疫組化技術(shù)檢測(cè)腸道組織細(xì)胞凋亡及凋亡基因Bax、Bcl-2的表達(dá)，同時(shí)采用圖像分析系統(tǒng)對(duì)其結(jié)果進(jìn)行量化分析。所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)+S）表示，采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：
　　1.肉眼觀察:對(duì)照組小鼠一般情況良好，生命活動(dòng)無(wú)明顯改變;假造模組活動(dòng)減少，精神食欲差、造模組小鼠精神萎靡，基本不活動(dòng)，個(gè)別處于瀕死狀態(tài)，治療組出現(xiàn)立毛、活動(dòng)減少等精神差的表現(xiàn);開腹后肉眼觀察腹腔情況:對(duì)照

5、組小鼠內(nèi)臟顏色紅潤(rùn)，腸道蠕動(dòng)好，未見明顯異常，假造模組小鼠腹腔內(nèi)臟顏色蒼白，組織水腫，腸道蠕動(dòng)減弱，而造模組腸壁明顯水腫，蠕動(dòng)差，合并腸脹氣擴(kuò)張，個(gè)別有腸穿孔現(xiàn)象，腸壁外有膿苔附著甚至膿性腹水;經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)抑素治療后小鼠的精神有所好轉(zhuǎn)，活動(dòng)及食欲增加，腹腔標(biāo)本肉眼觀見腸道組織顏色變紅潤(rùn)，腸蠕動(dòng)增強(qiáng)，腸腔脹氣及組織水腫均有所好轉(zhuǎn)。
　　2.腸粘膜白色念珠菌菌落(CFU)計(jì)數(shù)情況:各組均有白色念珠菌感染定植現(xiàn)象，在顯色培養(yǎng)基呈藍(lán)色光滑菌落

6、;通過(guò)菌落培養(yǎng)計(jì)數(shù)顯示假造模組和對(duì)照組之間無(wú)明顯變化(P＞0.05)，而造模組比假造模組明顯增多(P＜0.01)，經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)抑素治療后（治療組）白色念珠菌落明顯減少(P＜0.01)。
　　3.組織病理學(xué)檢測(cè):對(duì)照組未見明顯的病理變化，假造模組、造模組和治療組腸粘膜均有不同程度的炎癥反應(yīng)，具體表現(xiàn)為:腺體腫脹、炎癥細(xì)胞聚集、浸潤(rùn)、毛細(xì)血管及微小靜脈擴(kuò)張充血，腸絨毛尖端壞死、脫落等現(xiàn)象;假造模組腸粘膜較對(duì)照組損傷明顯出現(xiàn)炎性損傷(p＜0

7、.05)，造模組腸粘膜損傷程度大于假造模組(P＜0.05)，經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)抑素治療后（治療組）腸粘膜損傷明顯減輕(P＜0.01).
　　4.腸粘膜組織細(xì)胞凋亡:各組小鼠腸粘膜均有凋亡細(xì)胞（鏡下表現(xiàn)為體縮小、核固縮、染色質(zhì)凝聚等特點(diǎn)），以對(duì)照組為參照，假造模組的凋亡細(xì)胞明顯多于對(duì)照組(P＜0.05)，造模組的凋亡細(xì)胞明顯多于假造模(P＜0.05);經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)抑素治療后（治療組）凋亡細(xì)胞明顯減少(P＜0.05)。
　　5.凋亡細(xì)胞Bcl

8、-2基因表達(dá):Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞染色呈棕黃色，大部分位于胞漿，各組小鼠的腸粘膜細(xì)胞均可見，但各組表達(dá)水平有差別;假造模組的凋亡細(xì)胞Bcl-2基因表達(dá)少于對(duì)照組(P＜0.05);造模組明顯小于假造模組(P＜0.05);經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)抑素治療后（治療組）Bcl-2表達(dá)水平較造模組明顯升高(P＜0.05)。
　　6.Bax陽(yáng)性細(xì)胞染色呈棕黃色，大部分位于胞漿，各組小鼠的腸粘膜細(xì)胞均可見，但各組表達(dá)水平有差別，假造模組、造模組及治療組比對(duì)照組升

9、高，經(jīng)過(guò)秩和檢驗(yàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而造模組、造模組及治療組之間Bax表達(dá)水平均無(wú)明顯變化(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.白色念珠菌促進(jìn)腸粘膜細(xì)胞凋亡可能與Bcl-2基因表達(dá)的下降相關(guān)。
　　2.尾靜脈注射生長(zhǎng)抑素（14肽）對(duì)腸道感染白色念珠菌的小鼠有治療作用，具體表現(xiàn)為:
　　(1)減少小鼠腸道內(nèi)白色念珠菌定植數(shù)目；
　　(2)減輕腸粘膜的炎性損傷，保護(hù)腸粘膜；
　　(3)減少腸