腸道白色念珠菌感染小鼠模型及清胰湯對其影響的研究.pdf

1、目的
　　1.用高濃度白色念珠菌懸液作用于腸道菌群失調(diào)的免疫抑制小鼠復(fù)制腸道白色念珠菌感染的小鼠模型。
　　2.用清胰湯治療腸道白色念珠菌感染的模型小鼠研究其對該模型小鼠腸粘膜的影響。
　　方法
　　健康SPF級昆明小鼠80只,4周齡,體重20±5g,隨機(jī)分為4組,每組20只,9只死亡;對照組15只,假造模組17只,模型組20只以及治療組19只,假造模組、造模組和治療組用硫酸鏈霉素(Streptomycin, S

2、,100mg/ml)0.4ml灌胃和環(huán)磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX,50mg/kg)腹腔注射(Intraperitone,i.p.)連續(xù)5天,對照組用無菌生理鹽水(Normal Saline,NS)做相應(yīng)處理;造模組和治療組在硫酸鏈霉素和環(huán)磷酰胺作用連續(xù)5天后用濃度為1.6×109的白色念珠菌(Candida albicans,CB)懸液灌胃0.5ml復(fù)制腸道白色念珠菌感染的小鼠模型,對照組和假造模組用NS做相應(yīng)處理

3、;治療組在白色念珠菌灌胃后12h開始用清胰湯(QingYi Tang,QYT,0.5ml,Tid)灌胃,對照組、假造模組和造模組用NS做相應(yīng)處理,連續(xù)5天后處死小鼠,無菌打開腹腔,觀察腸道大體變化;取出回盲部,收集回盲部近、遠(yuǎn)端腸粘膜組織進(jìn)行白色念珠菌顯色培養(yǎng),回盲部腸道組織制成石蠟切片用于檢測HE病理、腸粘膜細(xì)胞凋亡以及Bcl-2和Bax表達(dá)的變化。
　　結(jié)果
　　1.大體觀察:對照組小鼠未見明顯異常;假造模組、造模組和治

4、療組出現(xiàn)立毛、活動減少等精神差的表現(xiàn);開腹后發(fā)現(xiàn)假造模組小鼠腹腔內(nèi)腸道組織蒼白,蠕動減弱,而造模組更加明顯,且出現(xiàn)腸道明顯脹氣、擴(kuò)張,腸壁水腫甚至腹水的出現(xiàn);治療組經(jīng)過清胰湯治療后小鼠的精神好轉(zhuǎn),開腹后可見腸道組織顏色變紅潤,腸蠕動增強(qiáng),腸腔脹氣消失。
　　2.腸道白色念珠菌培養(yǎng):對照組、假造模組、造模組和治療組腸道內(nèi)均出現(xiàn)白色念珠菌生長,在顯色培養(yǎng)基呈藍(lán)色光滑菌落;通過菌落培養(yǎng)計數(shù)顯示假造模組和對照組之間無明顯變化(P>0.05

5、),而造模組與假造模組比較明顯增多(P<0.01),治療組經(jīng)過清胰湯治療后白色念珠菌落明顯減少(P<0.01)。
　　3.病理學(xué)觀測:對照組未見明顯的炎癥反應(yīng),假造模組、造模組和治療組腸粘膜均有不同程度的炎癥反應(yīng),出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤、腸絨毛尖端脫落等現(xiàn)象;假造模組腸粘膜損傷較對照組有所加重(p<0.05),但造模組腸粘膜損傷程度與假造模組比較更加嚴(yán)重(P<0.05),治療組經(jīng)過清胰湯治療后腸粘膜損傷明顯減輕(P<0.01).

6、　　4.腸粘膜細(xì)胞凋亡:各組小鼠腸粘膜均可見胞體縮小、核固縮、染色質(zhì)凝聚為特點(diǎn)的凋亡細(xì)胞,胞核呈棕黃色或黃褐色;對照組可見一定數(shù)量的腸粘膜凋亡細(xì)胞,假造模組的凋亡細(xì)胞較對照組明顯增多(P<0.05),而造模組與假造模組比較更加明顯(P<0.05);治療組經(jīng)過清胰湯治療后凋亡細(xì)胞明顯減少(P<0.05)。
　　5.腸粘膜細(xì)胞Bcl-2表達(dá):各組小鼠的腸粘膜細(xì)胞均可見染色呈棕黃色 Bcl-2陽性細(xì)胞,主要位于胞漿;假造模組的Bcl-2

7、表達(dá)與對照組比較有所減少( P<0.05);而造模組與假造模組比較減少更加明顯(P<0.05);而治療組用清胰湯治療后Bcl-2表達(dá)水平較造模組明顯升高(P<0.05)。
　　6.腸粘膜細(xì)胞Bax表達(dá):各組小鼠的腸粘膜細(xì)胞均可見染色呈棕黃色Bax陽性細(xì)胞,主要位于胞漿;對照組可見少量的Bax表達(dá),假造模組的Bax表達(dá)水平較對照組有所增加(P<0.05),而造模組與假造模組(P>0.05)以及治療組與造模組(P>0.05)之間Bax