小鼠胃白念珠菌感染動(dòng)物模型建立.pdf

1、背景：近年來，由于廣譜抗生素、皮質(zhì)類固醇激素和免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用，導(dǎo)管插管和器官移植等新技術(shù)的開展，念珠菌感染的發(fā)病率呈上升趨勢，在院內(nèi)感染真菌中占首位，且耐藥菌株逐漸增多。由于臨床上高效安全的抗真菌藥物數(shù)目較少，因此念珠菌感染給以上人群生命安全帶來威脅。胃腸道念珠菌感染僅次于下呼吸道占第二位，以白念珠菌最多，推測機(jī)體免疫力低下、慢性胃腸道疾病常常是寄生于胃腸道的白念珠菌感染的誘因，且胃腸道念珠菌感染常為系統(tǒng)播散性念珠菌感染的一個(gè)入侵

2、門戶。 目的：已有多篇文章報(bào)道通過口服白念珠菌后取小鼠腸道組織勻漿進(jìn)行真菌培養(yǎng)、然后再菌落計(jì)數(shù)，發(fā)現(xiàn)用白念珠菌口服或灌胃的方法均能發(fā)現(xiàn)白念珠菌在小鼠胃腸道定植，證明作為條件致病菌的白念珠菌可在小鼠胃腸道粘附。根據(jù)臨床上免疫力低下及胃潰瘍病人易出現(xiàn)消化道念珠菌病推測，免疫力低下及消化道潰瘍可能給定植于胃腸道的白念珠菌以大量繁殖和侵入胃腸道粘膜創(chuàng)造了條件。通過降低小鼠免疫力并給小鼠胃腸道造成潰瘍，然后用白念珠菌灌胃建立小鼠胃白念珠菌

3、感染動(dòng)物模型，觀察小鼠胃白念珠菌感染后胃組織病理學(xué)表現(xiàn)，將能解釋為什么臨床上免疫力低下病人及胃潰瘍病人易出現(xiàn)消化道念珠菌??；并能評(píng)估胃腸道白念珠菌在免疫力低下病人及胃潰瘍病人胃腸道損害中的地位；還可以為進(jìn)一步研究其感染方式、致病機(jī)理、藥物篩選及開發(fā)奠定基礎(chǔ)，為臨床治療提供依據(jù)。 方法：將昆明小鼠110只隨機(jī)分成三組。對(duì)照組Ⅰ(30只)給予濃度5.5×1012白念珠菌菌懸液0.5ml灌胃后在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下喂養(yǎng)；對(duì)照組Ⅱ(40只)腹

4、腔內(nèi)注射濃度40mg/ml的環(huán)磷酰胺溶液0.02ml/g(體重），并用0.3％冰醋酸溶液0.5ml灌胃后在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下喂養(yǎng)；模型組(40只)腹腔內(nèi)注射濃度40mg/ml的環(huán)磷酰胺溶液0.02ml/g(體重)，并用0.3％冰醋酸溶液0.5ml灌胃，2小時(shí)后給予濃度5.5×1012白念珠菌菌懸液0.5ml灌胃，然后在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下喂養(yǎng)。2小時(shí)后取對(duì)照組Ⅱ小鼠3只斷頸處死、剖腹，沿胃長軸剪開胃壁，觀察胃外觀及潰瘍情況，并剪取胃組織進(jìn)行組織病

5、理檢查(常規(guī)HE染色)。于第10天將三組存活小鼠斷頸處死，觀察胃外觀及潰瘍情況，取胃組織置于含一滴10％KHO溶液的載玻片上，放入60℃電熱恒溫水溫箱中溶解10分鐘做真菌鏡檢、并剪取胃組織進(jìn)行組織病理檢查，同時(shí)取所有真菌鏡檢陽性胃組織經(jīng)念珠菌顯色培養(yǎng)基30℃培養(yǎng)48小時(shí)，觀察菌落。用模型組與對(duì)照組Ⅰ、對(duì)照組Ⅱ的真菌鏡檢、組織HE染色陽性率(在組織真菌鏡檢或HE染色中發(fā)現(xiàn)菌絲為陽性)進(jìn)行比較，采用x2檢驗(yàn)。 結(jié)果: 1.對(duì)

6、照組Ⅱ小鼠分別于實(shí)驗(yàn)第二、三天、五天各死亡1只，模型組小鼠于實(shí)驗(yàn)第三天死亡1只，四天死亡2只，六天死亡1只。 2.對(duì)照組Ⅱ中3只灌胃2小時(shí)后的小鼠胃均出現(xiàn)肉眼可見潰瘍。 3.對(duì)照組Ⅰ有4只小鼠胃組織真菌鏡檢見少量菌絲，組織病理HE染色30只小鼠均未見孢子及菌絲；對(duì)照組Ⅱ存活的34只小鼠胃組織真菌鏡檢及組織病理HE染色均未見孢子及菌絲；模型組存活的36只小鼠中有33只胃組織真菌鏡檢發(fā)現(xiàn)念珠菌孢子、芽生孢子、假菌絲及大量成團(tuán)

7、菌絲，33只真菌鏡檢陽性的小鼠中，有28只胃組織病理HE染色在胃粘膜表面膿瘍中及粘膜淺層見大量芽生孢子、假菌絲及菌絲，模型組存活的36只小鼠中，真菌鏡檢陰性的3只小鼠胃的組織病理HE染色未見孢子及菌絲。對(duì)照組II及模型組組織病理HE染色均發(fā)現(xiàn)胃粘膜組織水腫，部份結(jié)構(gòu)紊亂及壞死；所有真菌鏡檢陽性胃組織經(jīng)念珠菌顯色培養(yǎng)基30℃培養(yǎng)48小時(shí)均生長出綠色酵母樣菌落。 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果：模型組與對(duì)照組Ⅰ真菌鏡檢陽性率比較x2=40.763，模型組與

8、對(duì)照組Ⅰ組織病理HE染色陽性率比較x2=40.526；模型組與對(duì)照組Ⅱ真菌鏡檢陽性率比較x2=58.964，模型組與對(duì)照組Ⅱ組織病理HE染色陽性率比較x2=44.074。 結(jié)論: 1.給小鼠腹腔內(nèi)注射濃度40mg/ml的環(huán)磷酰胺溶液0.02ml/g(體重)，并用0.3％冰醋酸溶液0.5ml灌胃，2小時(shí)后造成小鼠胃肉眼可見潰瘍。 2.模型組與對(duì)照組Ⅰ、對(duì)照組Ⅱ的真菌鏡檢、組織HE染色陽性率比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明

9、模型組比對(duì)照組Ⅰ、對(duì)照組Ⅱ小鼠胃白念珠菌感染率明顯增高。證明給小鼠腹腔內(nèi)注射濃度40mg/ml的環(huán)磷酰胺溶液0.02ml/g(體重)，使小鼠免疫力下降，并用0.3％冰醋酸溶液0.5ml灌胃2小時(shí)后造成小鼠胃潰瘍，2小時(shí)后給予濃度5.5×1012白念珠菌菌懸液0.5ml灌胃可用來制作小鼠胃白念珠菌感染動(dòng)物模型。 3.對(duì)照組Ⅱ及模型組持續(xù)胃潰瘍、水腫外觀無明顯差異，因此白念珠菌在小鼠胃損害中有無加重?fù)p害程度及對(duì)胃損害的的愈合有無不良