系統(tǒng)性白念珠菌感染快速檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：據(jù)報(bào)道[1,2,3]，由于廣譜抗生素、皮質(zhì)類(lèi)固醇激素、免疫抑制劑和細(xì)胞毒抗惡性腫瘤藥物在臨床上的廣泛應(yīng)用，以及器官移植，導(dǎo)管插管和放療、化療的開(kāi)展，尤其免疫抑制或免疫缺陷的患者在不斷地增加，導(dǎo)致了系統(tǒng)性真菌的感染率逐年上升，白念珠菌是最常見(jiàn)的致病菌株。早期、快速診斷系統(tǒng)性白念珠菌感染，能夠有效的指導(dǎo)臨床用藥，抓住治療時(shí)機(jī)，為整個(gè)疾病的好轉(zhuǎn)及減少病死率提供重要保證。本實(shí)驗(yàn)建立系統(tǒng)性白念珠菌感染動(dòng)物模型，并篩選出McAb03.2C1-

2、C2最佳稀釋濃度，建立系統(tǒng)性白念珠菌感染快速檢測(cè)系統(tǒng)，探討其特異度(specificity)和敏感度(sensitivity),初步檢測(cè)系統(tǒng)性白念珠菌感染病人的血清標(biāo)本。
　　方法:經(jīng)新西蘭大耳白兔耳緣靜脈注射1.5ml，濃度為5X107cells/ml（半數(shù)致死量）白念珠菌菌液，于注射后12h、24h、48h、72 h、1w、2w分別采集兔血，2w后處死動(dòng)物，無(wú)菌操作取腎臟、肝臟組織行PAS染色，建立系統(tǒng)性白念珠菌感染動(dòng)物模型；

3、采用方陣滴定ELISA法，DTT法提取帶芽管白念珠菌孢壁外膜（倍比稀釋0.625-40μg/ml）為包被抗原，McAb03.2C1-C2（倍比稀釋1:250-1:128000）為Ⅰ抗，辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG為Ⅱ抗，篩選出McAb03.2C1-C2最佳稀釋濃度和抗原的包被濃度；用McAb03.2C1-C2最佳稀釋濃度作為包被抗體，HRP- McAb03.2C1-C21:5000作為檢測(cè)抗體，采用雙抗體酶聯(lián)免疫法檢測(cè)

4、動(dòng)物模型和系統(tǒng)性白念珠菌感染病人的血清標(biāo)本，用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)算A值，探討其特異度和敏感度。
　　結(jié)果:兔血培養(yǎng)檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果和腎臟組織病理學(xué)檢測(cè) PAS染色見(jiàn)紫紅色孢子、菌絲和大量的中性粒細(xì)胞，證明動(dòng)物模型建立成功；間接ELISA實(shí)驗(yàn)篩選出抗原包被濃度為1.25μg/ml-40μg/ml和McAb03.2C1-C2稀釋度為1:4000-1:8000時(shí)有較好的線性關(guān)系，McAb03.2C1-C2稀釋度1:400

5、0可作為雙抗體酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)的包被抗體；檢測(cè)動(dòng)物模型血清標(biāo)本的特異度和敏感度分別為95.2％、92.3%，在白念珠菌感染12小時(shí)就能檢測(cè)出白念珠菌芽管上抗原，隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)，測(cè)的A值數(shù)值逐漸降低，呈現(xiàn)抗原濃度在血中含量有逐漸減少的變化；5例患者血標(biāo)本A值平均值分別為0.102、0.109、0.121、0.100、0.117，5例P/N值≥2.1，檢測(cè)為陽(yáng)性，ELISA檢測(cè)病人血清標(biāo)本與血培養(yǎng)結(jié)果相一致。
　　結(jié)論:通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，