

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1、山西醫(yī)科大學碩士學位論文PCRRFLP技術快速檢測和鑒定血液中念珠菌的實驗性研究姓名:劉穎慧申請學位級別:碩士專業(yè):皮膚病與性病學指導教師:甄莉20080325山西醫(yī)科大學碩士學位論文StudyontheidentificationofCandidaSpeciesinthebloodbyPCR—RFLPassayAbstractobjective:ToestablishrapidmethodstodetectandidentifyCan
2、didaisolatesinthebloodsamplesbyusingPCRRFLPMethods:BiospinFungusGenomicDNAExtractionKit(hereinaftertobereferredasBiospin)wasusedtoisolatedDNAfrom50sampleswhichweretheCandidaspeciesinthebloodpreparationandcompared、析thconv
3、entionalphenol—chloroformextractionmethod20sampleswhichweretheCandidaspeciesinthebloodpreparationweredetectedandidentifiedbyRFLPassayandcomparedwithconventionalculturemethodFurthermoredetectRFLPassay’Ssensitivitystabilit
4、yaswellasspecificityResults:lCandidaalbicans,Candidaparapsilosis,Candidakruseicanbeamplifiedbytheuniversalprimerpair,theproductswereabout520bp2ThedetectionlimitofCandidaalbicansinsimulatedbloodsample、ⅣimuniversalprimerPC
5、RWas10CFU/m13AfteramplificationfromCandidaalbicans,Candidaparapsilosis,Candidakrusei,andtheproductsweredigestedwithMspI,productingthreeuniquebandpatterns,respectively4BiospinFungusGenomicDNAExtractionKit,whichwasusedtois
6、olatedDNAfromCandidaspeciesisbetterthanconventionalphenolchloroformextractionmethod(f=7259P001)5PCR—RFLPwereassaydetectedandidentifiedCandidaspeciesinthebloodpreparationisbetterthanconventionalculturemethod(p005)andbotho
7、fthemhavebetteragreement(K=0694p001)Conclusions:PCR—RFLPassayisarapid,sensitiveandspecificmethodtodetectCandidaisolateswhichiscomparedwimconventionalculturemethodKeywords:Candidaisolates,PolymeraseChainReaction,restricti
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