PCR技術(shù)快速檢測啤酒腐敗菌.pdf

1、長期以來，啤酒污染菌檢測一直采用傳統(tǒng)微生物檢測方法：啤酒腐敗菌采用特定培養(yǎng)基并在厭氧環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)檢出，這通常需要一周的時間，非常不利于對啤酒釀造過程微生物進(jìn)行監(jiān)控。PCR技術(shù)是一種體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列的方法，具有快速、靈敏、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)。 本文從天目湖啤酒廠實際情況出發(fā)，首先從啤酒廠的發(fā)酵液、清酒、空氣、水和瓶蓋等樣品中分離篩選得到53株污染菌，分別用PCR鑒定技術(shù)和傳統(tǒng)腐敗菌鑒定方法進(jìn)行了對照，發(fā)現(xiàn)兩種方法的鑒

2、定結(jié)果完全一致，最后通過植菌實驗確定了污染菌的腐敗能力。本文還對傳統(tǒng)氣體污染微生物檢測系統(tǒng)進(jìn)行了改進(jìn)，設(shè)計了氣體微生物過濾器，避免了傳統(tǒng)“吹洗”培養(yǎng)基檢測方法較高的微生物漏檢率。 論文對PCR檢測的靈敏度進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)PCR檢測對純DNA樣品有較高的靈敏度，而對于腐敗菌細(xì)胞裂解液和啤酒樣品的最低檢測限為50個和100個細(xì)胞。 為了提高PCR檢測靈敏度和穩(wěn)定性，本文采用了微生物預(yù)富集培養(yǎng)技術(shù)。本文主要從培養(yǎng)基選擇和培養(yǎng)條

3、件兩個方面進(jìn)行了研究，確定了改良MRS培養(yǎng)基為最佳的預(yù)富集培養(yǎng)基；確定了最佳預(yù)富集培養(yǎng)條件為：250mL錐形瓶培養(yǎng)基裝液量100mL，好氧培養(yǎng)，搖瓶轉(zhuǎn)速100r/min，30℃恒溫培養(yǎng)24h。本文對厭氧菌計數(shù)方法進(jìn)行了研究，選擇采用高層半固體培養(yǎng)法進(jìn)行厭氧菌計數(shù)。 論文對PCR技術(shù)在啤酒生產(chǎn)中的應(yīng)用進(jìn)行了研究，分別建立了發(fā)酵液、酵母泥、清酒和成品啤酒腐敗菌快速PCR檢測技術(shù)，同時用傳統(tǒng)方法進(jìn)行了對照。實驗發(fā)現(xiàn)PCR檢測技術(shù)不僅快