基于PCR技術(shù)的木材腐朽菌快速鑒定方法的研究.pdf

1、近年來(lái)，我國(guó)的森林資源面臨著嚴(yán)重的短缺問題，木材的供需矛盾日益尖銳。如何合理的利用和節(jié)省木材資源，是一個(gè)急需解決的問題，保證木材優(yōu)越的質(zhì)量顯得尤為重要。在影響木材質(zhì)量的眾多因素中，由木材腐朽菌侵染木材而引起的木材腐朽現(xiàn)象十分常見。木材腐朽每年造成大量的木材資源流失，降低了木材的質(zhì)量，嚴(yán)重影響木材的使用。為保護(hù)木材資源和合理地使用木材，人們對(duì)木材腐朽及木材腐朽菌作了廣泛而深入的研究。
　　目前鑒定木材腐朽菌的方法主要有兩種，一種是傳

2、統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定方法，即通過觀察菌落的宏觀培養(yǎng)特性和微觀培養(yǎng)特性的特征來(lái)對(duì)菌種進(jìn)行鑒定和分類;另一種是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的分子水平的鑒定方法，即利用PCR技術(shù)快速鑒定出木材腐朽的病原菌。
　　本文首先通過大量實(shí)驗(yàn)分別摸索出最適宜木材腐朽菌A、B生長(zhǎng)的最適溫度、pH值、光照強(qiáng)度、液體培養(yǎng)時(shí)搖晃轉(zhuǎn)速。之后通過形態(tài)學(xué)鑒定方法，觀察并記錄兩種木材腐朽菌菌落的生長(zhǎng)率、菌落形狀、菌落質(zhì)地、菌落顏色、培養(yǎng)基的顏色變化以及菌落邊緣菌絲的特征、培養(yǎng)基中主

3、要菌絲的類型、產(chǎn)孢情況等，用傳統(tǒng)的方法對(duì)兩種木材腐朽菌進(jìn)行鑒定，鑒別出了木材腐朽菌A為擔(dān)子菌綱、多孔菌目、多孔菌科、栓菌屬的真菌，木材腐朽菌B屬于擔(dān)子菌綱、多孔菌目、多孔菌科、多孔菌屬。
　　之后設(shè)計(jì)7組引物，優(yōu)化PCR反應(yīng)的條件，擴(kuò)增已提取純化的DNA，并將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，擴(kuò)增產(chǎn)物回收后送檢測(cè)序后，登錄Genebank將測(cè)序產(chǎn)物與數(shù)據(jù)庫(kù)中的DNA序列進(jìn)行對(duì)比，確定木材腐朽菌A為Trametes versicolo

4、r(L.) Lloyd.彩絨革蓋菌，木材腐朽菌B屬于多孔菌屬真菌。最后對(duì)比形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果與基于PCR產(chǎn)物的分子生物學(xué)鑒定結(jié)果，兩種鑒定方法得到的鑒定結(jié)果基本一致。
　　通過分析得出結(jié)論:僅僅使用常規(guī)鑒定方法鑒別菌種，常易發(fā)生錯(cuò)誤，結(jié)合分子鑒定技術(shù)可以使菌種的鑒別較為方便，結(jié)果更加準(zhǔn)確;分子鑒定技術(shù)可為木材腐朽菌菌種鑒定提供分子水平上的依據(jù)，使用多組引物同時(shí)對(duì)菌種進(jìn)行擴(kuò)增，能更準(zhǔn)去的測(cè)定待測(cè)樣品的種系，但是對(duì)有疑問或有爭(zhēng)議的菌種，應(yīng)