生殖器念珠菌病都柏林念珠菌的分離與PCR-RAPD方法鑒定.pdf

1、目的：通過芽管試驗、厚壁孢子試驗、CHROM顯色試驗、42℃溫度試驗、API20CAUX糖同化試驗等表型方法結(jié)合RAPD(隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA)方法分離和鑒定都柏林念珠菌。建立一種簡單、可靠、快速的基因型鑒定方法，調(diào)查本院區(qū)性病門診生殖器念珠菌病患者都柏林念珠菌的陽性率。 方法：收集了2002年10月～2006年3月期間到天津市性傳播疾病研究所門診就診的生殖器念珠菌病患者的700例臨床菌株和北京大學(xué)真菌和真菌病研究中心饋贈的白念

2、珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC-11006、都柏林念珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株CBS-8501作為樣本，所有臨床菌株均經(jīng)過芽管試驗、厚壁孢子試驗、CHROM顯色試驗鑒定為白念珠菌，然后將上述菌株進(jìn)行42℃溫度試驗和API20CAUX試驗。溫度試驗作為初篩試驗篩選出108株陽性菌株。然后，將42℃溫度試驗中生長不良或完全不生長的原菌株在沙氏培養(yǎng)基活化兩遍，每次活化24h～48h。用含有蛋白酶K的裂解液裂解菌細(xì)胞，采用傳統(tǒng)的酚氯仿抽提，異丙醇沉淀法制備DNA模板。

3、通過RAPD的方法對基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，2％的瓊脂糖凝膠電泳紫外線燈下觀察帶型。 結(jié)果：經(jīng)過三遍溫度試驗后，108例臨床菌株和1例都柏林念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株幾乎無生長。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行2％的瓊脂糖凝膠電泳，顯示兩種截然不同的帶型，可以清楚的區(qū)分開白念珠菌和都柏林念珠菌。但未在臨床標(biāo)本中篩選出都柏林念珠菌。 結(jié)論： 1.生殖器念珠菌病的白念珠菌中，15.4％的菌株在42℃溫度試驗幾乎無生長或生長較差。 2.厚壁