白念珠菌HOG基因致病相關性研究.pdf

1、目的：比較白念珠菌HOG21(hog/hog雙等位基因缺失株)、CHK21(chk/chk雙等位基因缺失株)和標準株CAF-2菌株細胞壁超微結構、對氟康唑MIC值及在系統(tǒng)性感染小鼠模型中致病力的差異，探討HOG基因在白念珠菌致病機制中的作用及其與CHK基因的關系，旨在尋找系統(tǒng)性白念珠菌感染致病相關基因，篩選新的抗真菌藥物作用靶點，為今后研發(fā)出更高效、低毒、廣譜的新型抗真菌藥物提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.建立系

2、統(tǒng)性白念珠菌感染小鼠模型，比較死亡率并描繪生存曲線；平皿稀釋法檢測各組脾腎組織菌落形成單位(CFU)數(shù)目；制作腎組織病理學標本，評估真菌感染程度。
　　 2.利用掃描和透射電鏡觀察三株菌株細胞壁超微結構的差異。
　　 3.微量稀釋法檢測三株菌株對氟康唑MIC值的差異。
　　 結果：
　　 1.體內實驗：
　　 (1)成功建立系統(tǒng)性白念珠菌感染小鼠模型。
　　 (2)CAF-2組、CHK21

3、組和HOG21組感染小鼠觀察期間死亡率分別為100％、0、0，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 (3)脾腎組織菌落形成單位(CFU)結果：各觀察時間點CAF-2組脾腎組織帶菌量(CFU)比HOG21組和CHK21組高，差異有統(tǒng)計學意義；HOG21組與CHK21組比較差異無統(tǒng)計學意義。
　　 (4)組織病理學觀察結果：CAF-2組腎髓質區(qū)見彌漫性菌絲和孢子，伴人多形核粒細胞(PMN)為主的炎性細胞浸潤，腎組織結構破壞嚴重；HOG2

4、1組腎乳頭見少量菌絲和孢子被PMN包裹形成局限性膿腫；CHK21組則表現(xiàn)為以腎臟髓腔內PMN浸潤為主。電鏡結果：CAF-2組腎小管上皮細胞微絨毛破壞嚴重；HOG21組腎小管上皮細胞內見被吞噬的孢子；而CHK21組腎組織病變較輕。
　　 2.體外實驗：
　　 (1)掃描電鏡下，CAF-2表面光滑；CHK21表面見小斑塊樣突起；HOG21表面見細小點狀突起。透射電鏡下，CAF-2胞壁結構完整，電子致密層、電子透明層及細胞膜各

5、層結構清晰可見；CHK21細胞壁可見電子致密層變薄甚至局灶性缺失；HOG21細胞壁電子透明層厚薄不一，部分見電子致密層局灶性缺失、細胞膜外突、不連續(xù)以及胞膜周圍囊泡聚集的現(xiàn)象。
　　 (2)微量稀釋法檢測各組酵母細胞對氟康唑MIC值：CAF-2:1ug/ml；CHK21:0.125～0.25ug/ml；HOG21:0.25ug/ml。
　　 結論：
　　 1.HOG基因參與白念珠菌致病性的調控過程。