白念珠菌IPF7817基因的生物學(xué)功能研究.pdf

1、IPF7817是白念珠菌的功能未知基因,已有研究結(jié)果提示該基因可能參與白念珠菌的耐藥和細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)的調(diào)節(jié),但是其確切的生物學(xué)功能在本研究開展之前尚不明確。本研究利用基因敲除技術(shù)系統(tǒng)性地考察了IPF7817的功能:首先應(yīng)用“Ura-blaster”策略將IPF7817的兩個(gè)等位基因從白念珠菌的基因組中敲除,繼而考察了IPF7817基因敲除對(duì)細(xì)胞內(nèi)氧化還原穩(wěn)態(tài)和耐藥表型的影響。氧化還原穩(wěn)態(tài)相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:IPF7817基因敲除后,細(xì)

2、胞內(nèi)的活性氧水平顯著提高；線粒體功能的直接指標(biāo)--線粒體膜電位升高；一些重要的氧化還原相關(guān)基因(包括GLR1、SOD2和TRR1)轉(zhuǎn)錄表達(dá)上調(diào)；細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的比值增加。上述結(jié)果提示:IPF7817在白念珠菌的氧化還原穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。考察IPF7817基因?qū)δ退幈硇陀绊懙膶?shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:IPF7817基因的缺失對(duì)白念珠菌的藥物敏感性沒有明顯影響；對(duì)白念珠菌藥物外排功能沒有明顯影響；但是會(huì)導(dǎo)致多藥耐藥基因MDR

3、1的表達(dá)上調(diào)；分別用6μg/mL和24μg/mL的氟康唑誘導(dǎo)白念珠菌耐藥性產(chǎn)生,MIC80檢測(cè)、Spot assay和Filter disk assay結(jié)果一致顯示:IPF7817基因缺失菌產(chǎn)生氟康唑抗性的時(shí)間明顯早于親本菌,并且對(duì)其他唑類藥物存在交叉耐藥性；經(jīng)氟康唑誘導(dǎo)后的基因缺失菌JH2F6-47、JH2F24-48相對(duì)于誘導(dǎo)后親本RM1000F6-47、RM1000F24-48,唑類藥物作用的靶酶基因ERG11表達(dá)顯著上調(diào)；敏感性