ALS基因mRNA在白念珠菌不同生物狀態(tài)的表達(dá).pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)酵母狀態(tài)和芽管狀態(tài)的白念珠菌ALS基因mRNA表達(dá)水平的比較，以及對(duì)浮游狀態(tài)和生物膜狀態(tài)的白念珠菌ALS基因mRNA表達(dá)水平的比較，探討白念珠菌ALS基因mRNA在白念珠菌芽管及生物膜形成中可能發(fā)揮的作用，為防治白念珠菌感染提供重要的理論依據(jù)。 方法：選取4株標(biāo)準(zhǔn)株白念珠菌和11株臨床株白念珠菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。白念珠菌酵母狀態(tài)的培育和芽管狀態(tài)的誘導(dǎo)以及浮游狀態(tài)和生物膜狀態(tài)白念珠菌的制備：GSB培養(yǎng)基，25℃振蕩培養(yǎng)48

2、h，收獲酵母狀態(tài)的白念珠菌；ph7.0的RPMI-1640液體培養(yǎng)基，37℃振蕩培養(yǎng)3h，收獲芽管狀態(tài)的白念珠菌；體外在6孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，RPMI-1640液體培養(yǎng)基，37℃靜置培養(yǎng)48h，收獲生物膜狀態(tài)的白念珠菌。熱酸性酚法抽取不同生長(zhǎng)狀態(tài)白念珠菌的總RNA，RNA的純度經(jīng)紫外分光光度計(jì)A260/A280比值估計(jì)，RT-PCR兩步法逆轉(zhuǎn)錄ALS2基因mRNA、ALS3基因mRNA以及ACT1基因mRNA，cDNA擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝

3、膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)拍照。利用Quantity One電泳分析軟件對(duì)ALS2基因和ALS3基因的cDNA擴(kuò)增條帶進(jìn)行分析，應(yīng)用SPSS11.5醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件包的計(jì)數(shù)資料配對(duì)樣本差值均數(shù)的t檢驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析(以P<0.05為顯著性標(biāo)準(zhǔn))。 結(jié)果:標(biāo)準(zhǔn)株白念珠菌芽管狀態(tài)的ALS2基因mRNA(P=0.005，P<0.01)和ALS3基因mRNA(P=0.0022，P<0.01)相對(duì)表達(dá)水平均明顯高于酵母狀態(tài)，臨床株白念珠菌芽管狀

4、態(tài)的ALS2基因mRNA(P=0.000，P<0.01)和ALS3基因mRNA(P=0.000，P<0.01)相對(duì)表達(dá)水平均明顯高于酵母狀態(tài)，其中標(biāo)準(zhǔn)株和臨床株白念珠菌中多數(shù)菌株未檢測(cè)ALS3基因mRNA的表達(dá)，個(gè)別菌株酵母狀態(tài)ALS3基因mRNA僅檢測(cè)到低水平的表達(dá)，：標(biāo)準(zhǔn)株白念珠菌生物膜狀態(tài)的ALS2基因mRNA(P=0.0276。P<0.05)和ALS3基因mRNA(P=0.0405，P<0.05)相對(duì)表達(dá)水平均明顯高于浮游狀態(tài)；