白念珠菌不同生物狀態(tài)下ALS4、ALS9基因mRNA的表達.pdf

1、目的:通過對白念珠菌酵母狀態(tài)和芽管狀態(tài)，以及浮游狀態(tài)和生物膜狀態(tài)下ALS4、ALS9基因mRNA表達水平的比較，探討這兩種基因在白念珠菌表型轉(zhuǎn)換及生物膜形成中可能發(fā)揮的作用，為進一步研究白念珠菌的發(fā)病機制提供理論依據(jù)。
　　 方法:選取3株標(biāo)準株白念珠菌和10株臨床株白念珠菌進行實驗研究。白念珠菌酵母狀態(tài)的培育和芽管狀態(tài)的誘導(dǎo)以及浮游狀態(tài)和生物膜狀態(tài)的制備:GBS培養(yǎng)基，25℃振蕩培養(yǎng)48h，收獲酵母狀態(tài)；pH7.0的RPMI-

2、1640液體培養(yǎng)基，37℃震蕩培養(yǎng)3h，收獲芽管狀態(tài)；體外6孔細胞培養(yǎng)板涂布小牛血清，RPMI-1640液體培養(yǎng)基，37℃靜置培養(yǎng)48h，收獲生物膜狀態(tài)。液氦反復(fù)凍融加Trizol法提取不同生長狀態(tài)白念珠菌的總RNA，RNA的純度經(jīng)紫外分光光度計A260/280比值估計，RT-PCR兩步法擴增ALS4、ALS9基因mRNA，及內(nèi)對照ACT1基因mRNA，擴增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)拍照。采用QuantityOne電泳分析軟件對電

3、泳條帶進行分析，應(yīng)用SPSS醫(yī)學(xué)統(tǒng)計軟件包兩樣本均數(shù)配對資料的t檢驗對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理（以P<0.05為顯著性標(biāo)準）。
　　 結(jié)果:標(biāo)準株白念珠菌芽管狀態(tài)的ALS4基因mRNA(P<0.05)和ALS9基因mRNA(P<0.05)相對表達水平均明顯高于酵母狀態(tài)，臨床株白念珠菌芽管狀態(tài)的ALS4基因mRNA(P<0.05)和ALS9基因mRNA(P<0.05)相對表達水平均明顯高于酵母狀態(tài)；標(biāo)準株白念珠菌生物膜狀態(tài)的ALS4