重組Sap2蛋白接種對免疫抑制小鼠系統(tǒng)感染白念珠菌的保護作用.pdf

1、背景：
　　 隨著新治療技術如骨髓移植、器官移植和強化治療的開展及廣譜抗生素和免疫抑制藥物的廣泛應用,臨床上發(fā)生念珠菌感染的現(xiàn)象越來越普遍,而抗真菌藥物由于其毒副作用和易產(chǎn)生耐藥的局限性,使得白念珠菌在免疫低下患者中的發(fā)病率依然居高不下.由此,為了探索免疫低下患者中預防白念珠菌感染的措施,有必要建立適當?shù)拿庖咭种坪笙到y(tǒng)感染念珠菌的動物模型,來模擬免疫功能低下患者的情況.我們同時也研究了重組念珠菌天冬氨酰蛋白酶(scrcted a

2、spartylproteinase,Sap)預防接種對免疫功能低下時系統(tǒng)感染念珠菌的保護作用.
　　 第一部分
　　 目的：
　　 建立免疫抑制小鼠系統(tǒng)感染白念珠菌模型,并觀察其主要影響因素.
　　 方法：
　　 1)以環(huán)磷酰胺(CTX)100mg/kg和200mg/kg兩個劑量水平分別對6周齡BALB/c小鼠進行單次腹腔注射(各3組),48h后各對應組分別經(jīng)尾靜脈注射1x105、106,107/

3、ml的白念珠菌,通過各組的死亡率來確定半數(shù)致死量.2)以50、100mg/kgCTX單次腹腔注射,觀察外周血中白細胞、淋巴細胞計數(shù)被抑制的程度.3)分別采用4和8周齡小鼠來觀察周齡對死亡率的影響.4)通過組織病理檢查和腎組織真菌培養(yǎng)來驗證模型.
　　 結果：
　　 1)100mg/kgCTX+1×105/ml白念珠菌作用后,小鼠的死亡率接近50％.2)100mg/kgCTX單次腹腔注射后,外周血中白細胞、淋巴細胞計數(shù)下降

4、超過30％.3)4周齡小鼠對模型建立條件的耐受性較差,死亡率高。4)組織病理檢查和腎組織真菌培養(yǎng)結果表明模型小鼠腎臟中有菌絲生長或局灶性膿腫形成.
　　 結論：
　　 1)成功建立了免疫抑制后系統(tǒng)感染白念珠菌的小鼠模型.2)模型建立條件下,白念珠菌對小鼠腎組織有高親嗜性.
　　 第二部分
　　 目的：
　　 觀察重組Sap2蛋白免疫接種3次(間隔1周)對模型小鼠抗白念珠菌系統(tǒng)感染的保護作用.

5、>　　 方法：
　　 6周齡BALB/C小鼠隨機分成3組:1)間隔1周,重組Sap2+弗氏完全佐劑(CFA)脛前肌注射3次,第3次免疫后1周時,按體重單次腹腔注射100mg/kgCTX,48h后經(jīng)尾靜脈注射1×105/ml的白念珠菌,劑量為0.01ml/g.2)間隔1周,CFA脛前肌注射3次,其余干預同第1組.3)間隔1周,PBS脛前肌注射3次,其余干預同第1組.分剮以這3種分組方式飼養(yǎng)小鼠,并在不同時間點檢測下列指標,探討模

6、型小鼠的免疫功能動態(tài)變化:1)白念珠菌感染后21天內各組小鼠的死亡率.2)間接ELISA法測定各組小鼠血清特異性IgG抗體水平.3)ELISA法測定小鼠血清中IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α的含量.4)流式細胞儀分析小鼠脾淋巴細胞中的CD4+/CD8+T細胞比例.5)測定各組小鼠腎臟中的荷菌量。6)比較各組小鼠脾臟重量.7)對各組小鼠的腎、肝、肺組織進行組織病理檢查.
　　 結果：
　　 1)免疫組小鼠的死亡率

7、顯著低于對照組.2)免疫組小鼠血清中的特異性IgG抗體水平的顯著高于對照組.3)念珠菌攻擊后的第1、4、7天期間,IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α在第4天時的測量值高于第1和第7天水平.其中TNF-α的測量值始終低于正常對照水平.4)念珠菌攻擊后的第1、4、7天期間,各組小鼠的CD4+/CD8+比值呈現(xiàn)相似的變化,其中第4天時的測量值低于第1和第7天水平.5)免疫組小鼠的腎臟荷菌量顯著低于對照組.6)免疫組小鼠的脾臟重量顯著高