免疫抑制劑介導(dǎo)侵襲性白色念珠菌腸源性感染機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　證實應(yīng)用免疫制劑、廣譜抗生素和（或）應(yīng)激狀態(tài)可致腸道菌群紊亂，導(dǎo)致原本少量的正常菌群（如白色念珠菌）及過路菌大量增殖，證實白色念珠菌血癥的來源是腸道菌群。
　　方法:
　　本課題為動物實驗，實驗對象是SD大鼠，將80只清潔級SD大鼠隨機(jī)分為4組，每組20只，分為第一組為免疫抑制組，第二組為免疫抑制+抗生素組;第三組免疫抑制+胰腺炎組;第四組為免疫抑制+胰腺炎+抗生素組。在以上個實驗組中，免疫抑制模型的建立為

2、在開始實驗第1天按照200mg/kg予以腹腔注射免疫抑制劑環(huán)磷酰胺1次[16];抗生素的模型按照100mg/kg給予尾靜脈注射頭孢曲松注射液，每日一次給藥，按照實驗分組給予相應(yīng)天數(shù)的抗生素注射[17];胰腺炎模型的建立為實驗結(jié)束前1天開始禁食不禁水，于禁食12小時后給予20％L-精氨酸液腹腔注射，每次按2.0g/kg給藥，共給藥兩次，中間間隔1小時[18]。四組中又分為5天實驗組和10天實驗組，每小組各10只。其余飲食、飲水、鼠籠、日照

3、時間等實驗條件相同。分別于實驗開始第5天、第10天，各取每組10只小鼠，離斷頸椎后無菌操作環(huán)境下快速取心內(nèi)血、腸內(nèi)容物、空腸腸壁、結(jié)腸腸壁、腸系膜淋巴結(jié)及胰腺。取血、腸內(nèi)容物及其他組織勻漿液做真菌培養(yǎng)，取空腸腸壁組、結(jié)腸腸壁及胰腺做病理鏡檢。對于真菌培養(yǎng)為陽性的標(biāo)本再行初步念珠菌顯色平板篩查，如果為白色念珠菌可應(yīng)用25S RDNA編碼區(qū)內(nèi)存在—可轉(zhuǎn)座Ⅰ型內(nèi)含子對白色念珠菌進(jìn)行分型分析技術(shù)[19-20]。后進(jìn)一步行抽提PCR擴(kuò)增，電泳檢測

4、，切膠純化測序，連接純化，分析序列結(jié)果，達(dá)到菌株層面的鑒定，確定是否有真菌突破感染。
　　結(jié)果:
　　1.在實驗第5天，免疫抑制+抗生素組的腸內(nèi)容物真菌培養(yǎng)陽性結(jié)果與免疫抑制組對比有顯著差異，表明實驗第5天已存在菌群紊亂，真菌增殖。
　　2.在實驗第10天，免疫抑制+抗生素組及免疫抑制+抗生素+胰腺炎組動物的腸內(nèi)容物真菌培養(yǎng)陽性結(jié)果與免疫抑制組對比有顯著差異，表明實驗第10天存在菌群紊亂，真菌增殖。
　　3.免疫

5、抑制+抗生素組與免疫抑制+抗生素+胰腺炎組動物的腸內(nèi)容物真菌培養(yǎng)陽性結(jié)果比較，無論是在實驗第5天還是在實驗第10天，兩者均無統(tǒng)計學(xué)差異，表明長時間應(yīng)用抗生素的基礎(chǔ)上，負(fù)荷應(yīng)激因素，并不會加重菌群紊亂。
　　4.在實驗第5天，免疫抑制+抗生素組的心內(nèi)血真菌培養(yǎng)陽性結(jié)果與免疫抑制組對比有顯著差異，表明實驗第5天已存在念珠菌血癥;其他組間無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。
　　5.在實驗第5天及實驗第10天，免疫抑制+抗生素組及免疫抑制+抗生素+